193928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bbm-1675 jelű daganatellenes hatású antibiotikumok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193928 fal aminosav összetétele és a teljes sejt hidrolizátumának cukor komponensei azt mutatják, hogy a H964-92 törzs a 111b sejtfal típushoz tartozik. A menakinon MK-9(H6) • MK-9 (H8)-ként volt azonosítható. A főbb morfológiai, tenyésztési és fiziológiai jellemzők szerint, együttesen a sejtfal vegyi összetételének jellemzőivel, a H964-92 törzs az Actinomadura nemzetségbe sorolható. Noha az eredeti H964-92 törzs csak mérsékelt növekedést mutatott,és gyér légmicéliummal rendelkezett, egy olyan variánst nyertünk nitrozoguanidines kezeléssel, amely jó növekedési készséget és javított légmicélium képzést mutatott. A variáns, amelyet A1327Y törzsnek neveztünk el, megkönnyítette a további rendszertani kutatást,és később Actinomadura verrucosospora törzsként volt azonosítható. A táptalajok és eljárások, amelyeket a tenyésztési jellemzők és a szénhidrát felhasználás vizsgálatára használtunk, megegyeztek a Nemzetközi Streptomyces Terv (International Streptomyces Project, ISP) (International J. Syst. Bacteriol. 16, 313-340, 1966) szerint ajánlottakkal. További olyan táptalajokat is használtunk, amelyeket S. A. Waksman (The Actinomycètes, 2. kötet) és G. M. Levedemann (Inti. J. Syst. Bacteriol. 21, 240-247, 1971) írtak le. A sejtfal aminosav összetételét és a teljes sejt hidrolizátumának cukor komponenseit a Becker és munkatársai (Appl. Microbiol. 13, 236-243, 1965) és Lechevalier és Lechevalier (The Actinomycètes, H. Prauser kiadása, Jena, Gustav Fischer Verlag, 393- -405, 1970) által leírt módszerek szerint elemeztük. A menakinont a Collins és munkatársai (J. Gen. Microbiol. 100, 221-230, 1977) által leírt tömegspektrometikai analitikai eljárással határoztuk meg, és a menakinon összetételét a Yamada et al. (J. Gen. Appl. Microbiol. 23, 331-335, 1977) által leírtakra alapozva mutattuk be. A H964-92 törzs szubsztrátum- és légmicéliumot egyaránt képez. A szubsztrátum micélium hosszú, elágazó és nem tördelődik rövid szálakká. A légmicéliumban rövid spóraláncok keletkeznek monopodikusan vagy a I. Táblázat 3 gombafonalak (hifák) hegyén. A hifás típus mellett spirális ágakhoz hasonló spóra-láncok is megfigyelhetők. E láncok egyenként 2-től 10 spórát tartalmaznak, alakjukat illetően 5 egyenesek, kacskaringósak vagy kampósak. A spórák felülete szemölcsös, gömb- vagy ovális alakúak (0,5-0,6x0,6-1,4 pm) s végeik lekerekítettek vagy hegyesek. Beérést,követően gyakorta minden spórát üres burok különít el. 10 A vizsgált anyagban mozgóképes spórákat, spóratokokat vagy megkeményedett granulákat nem találtunk. A H964-92 törzs mind a kémiailag definiált, mind pedig a természetes szerves táptalajo- 15 kon gyengétől mérsékeltig terjedő mértékben tenyészik. A légmicéliumok keletkezése általában gyenge, de már mérsékelt zabliszt agaron (ISP 3. sz. táptalaj), szervetlen sós-keményítős agar (ISP 4. sz. táptalaj) és Bennett-féle 20 agar táptalajon. Gyakran fordulnak elő olyan spontán variánsok, amelyeken a légmicélium hiányzik. A légmicélium színe fehér, ami később zabliszt agaron, szervetlen sós-keményítős agaron vagy glicerin-aszparagin agaron 25 (ISP 5. sz. táptalaj) világos rózsaszínűre fordul. A légmicélium tömegének színe, hoszszú tenyésztési idő (5 hónap) múlva zabliszt agaron, glicerin-aszparagin agaron és tirozin agaron kékesre fordul. A szubsztrátum micé- 30 Hum színe Czapek agaron, tirozin agaron, keményítőkivonat-malátakivonat agaron (ISP 2. sz. táptalaj), pepton-keményítőkivonat-vas agaron (ISP 6. sz. táptalaj) és Bennett agaron színtelentől sárgásig terjedő, glükóz-asz- 35 paragin agaron és glicerin-aszparagin agaron rózsaszínű. Melanoid vagy más diffúzióra képes pigmensek nem termelődnek. Az eredeti törzsből kapott A1327Y jelzésű törzs túlnyomóan halványkék színű légmicéliumot képez, 40 és a légspórák tömege bőséges. A H964-92 15°C-on, 28°C-on, 37°C-on és 43°C-on tenyészik, de 10°C-on vagy 47°C-on már nem. 7% koncentrációnál nátrium-klo"id érzékeny és 0,01% koncentrációban a lizo- 45 zimre ellenálló. A termelő törzs tenyésztési és élettani jellemzőit az I. táblázatban és a II. táblázatban mutatjuk be. A szénforrások felhasználását a III. táblázat szemlélteti. 4 A H964-92 törza tenyésztési jellemzői (aZ eredeti ATCC 39334 törzs és A1327Y (ATCC 39638) variánsa) H964-92 törzs Actinomadura----------------------------------------------- verrucosospora Eredeti törzs A1327Y variáns -------------------------(ATCC 39334) (ATCC 39638) KCC A-0147 Tripton-élesztőkivonat agar (ISP 1.sz.) N: bőséges, pelyhes, ülepedő és nem pigmentált nérsékelt, pely- mérsékelt, pelyhes, ülepedő és hes, ülepedő és nem pigmentált nem pigmentált 3
