193835. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szerves vegyületek előállítására
193835 / A. példa Egy ürütől, amely naponta 650 g durvára őrölt birkatápot és 250 g száraz zöldtakarmányt kapott, egy bendőfisztulán keresztül bendőfolyadékot vettünk. A kész tápot egy takarmányadagoló automatán 12 egyenlő részletben kétóránként, és a száraz zöldtakarmányt két egyenlő részletben, 8.30-kor és 16.15- kor adagoltuk. A bendőfolyadékot a vétel után közvetlenül a következőképpen kezeltük: 2,5 ml bendőfolyadékot egy 13 ml-es előzőleg széndioxiddal átöblített reakciócsőbe öntöttünk, amely ezenkívül még a következő anyagokat tartalmazta: 100 mg finomra őrölt birkatáp, 7,5 ml puffer-oldat 0,5 ml a találmány szerinti vegyületet tartalmazó vagy nem tartalmazó oldat. A kísérlet elejétől szén-dioxiddal telített puffer-o-ldat összetétele a következő volt (1 liter vízben): 13 Na2HP04 4,61 g NaHC03 12,25 g NaCl 0,59 g KCI 0,71 g MgCl2 0,32 g CaCl, 0,13 g Az anyagkeverékenkénti 10, 20, 30, illetve 40 pg találmány szerinti vegyületet először 0,25 ml etanolban oldottuk, majd hozzáadtunk 4,75 ml vizet. Ebből az oldatból 0,5 ml-t a reagenscsőbe pipettáztunk. Ezután a fermentációs elegy térfogata 10,5 ml volt. A negatív kontrolihoz (azaz tesztvegyület nélküli anyagkeverék) szintén adagoltunk 0,5 ml 5%-os etanol oldatot. Dózisonként 4 ismétlést végeztünk. A reagenscsöveket Bunsen-dugóval lezártuk, és 39°C-on tenyésztettük. 2, 4, 6 és 8 óra múlva a mintákat kézzel összeráztuk. 24 óra hosszat végzett tenyésztés után minden mintából kivettünk 1,0 ml-t, és egy Eppendorf-edénybe pipettáztuk, amely 0,2 ml 10%-os foszforsavat (amely 5,7 pmol metil-valeriánsavat tartalmazott) tartalmazott. A mintákat 10 000 g-vel centrifugáltuk, és a felüluszóból az illékony zsírsavkoncentrációt gázkromatográfiásán meghatároztuk. Az elemzési eredményeket a következő táblázatban foglaljuk össze. Az adatokat (ecetsav/propionsav arány és a teljes- zsírsavtermelés) a negatív kontroll százalékában adtuk meg: A táblázat A táblázatból látható, hogy a propionátrá számított acetát arány lényegesen csökken és így azzal, hogy a szénhidrátokból több propionát képződik, javul a takarmány-hasznosí- 5 tás. Az erjedés megnövekedett hatékonysága csak kismértékben megy a teljes zsírsav-termelés rovására, ahogyan ez a táblázatból látható. 10 B példa Hízócsírke (broiler) Ketrecben tartott, 3-5 napos állatokat egy 14 napig tartó kísérletnek vetettünk alá. Az állatok ezalatt 10 ppm, illetve 25 ppm 15 találmány szerinti vegyületet tartalmazó takarmányt kaptak. Negatív kontrollt is végeztünk, találmány szerinti vegyület nélkül. A kísérlet elején az állatokat olyan csoportokba osztottuk, ahol minden állat súlya azonos volt. 20 A kiértékelést a testsúlynövekedés, takarmányhasznosítás és takarmányfelvétel alapján végeztük. Az eredményeket a B táblázat tartalmazza. 25 Az állatok és a takarmány jellemzői: Válogatott hím hizóhibridek 24 állat/kísérlet (4x6) Súly: 50-65 g Takarmány: Höveler csirketápszer KA 57 anti- 30 biotikum és kokcidiosztatikus adalék nélkül, összetétel a következő: Értékmeghatározó alkotóelemek: 35 18% nyers protein 7% nyers rost 8% hamu 1% kalcium 0,7% foszfor 40 Összetétel: 54% takarmánygabona (40% kukorica, 12% búza) 17,5% szójahulladék 5,2% kukorica sikér takarmány 5,2% búzakorpa 3,1 % halliszt 3,1% tapiokaliszt 3,1% lucernazöld liszt 50 2,1% búzacsira (aprított) 1,7% csontliszt 1,6% tejpor 1,4% szénsavas takarmány mész 1,0% foszforsavas takarmány mész 55 1,0% melasz. B;táblázat 14 Kezelés Ecetsav- Összes ( jag/minta) -propionsav- zsírsav-arány (%) (%) 10 99,7 103,3 20 75,5 107,9 30 78,8 96,7 40 75,9 96,0 Kezelés Testsúly- Takarmány- Takarppm növekedés felhaszná- mánylás haszno sí tás 10 108% 97% 90% 25 108% 93% 86% 8
