193835. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szerves vegyületek előállítására
193835 A találmány tárgya mikrobiológiai eljárás új szerves vegyületek, valamint hatóanyagként ezeket tartalmazó antibiotikus és növekedés- és tápanyaghasznosítás-íokozó hatású készítmények előállítására. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek a következő tulajdonságokkal és paraméterekkel jellemezhetők: 1. A nátriumtartalmú antibiotikum IR-K.Br-abszorpciós spektrumát az 1. ábra mutatja (abszcissza: hullámszám (cm"1), ordináta: abszorpció). A következő hullámhosszoknál (cm-1) mutatkoznak jellemző abszorpciós sávok: 3456 1265 2960 1178 2910 1145 1750 1115 1700 1030 1635 950 1540 930 1395 825 2. 'H-magrezonancia spektrumot a 2. ábra mutatja, ppm és rezgés/sec értékekben. A spektrumot 300 MHz térerősségnél, deutero-metanolos oldatban, tetrametil-szilán deutero-metanolos oldatával mint belső standarddal vettük fel. 3. A l3C-magrezonancia spektrumot a 3. ábra mutatja. Az 'H-magrezonancia spektrumnál használttal azonos oldatban, 75,48 MHz térerősségnél felvéve. 4. Elemanalízis (két napi 30°C-on nagyvákuumban végzett szárítás után): C 61,1 — —62,3%, H 5,2—6,4%, 0 27,5—30,0%/ 5. összegképlet: (CI4_16H16.2004^)„. Megjegyzendő, hogy nagymolekulájú természetes anyagoknál az elemanalízis hibahatára nagyobb, mint a szokásos, ezért az összegképlet pontos meghatározása nem lehetséges (R. B. Woodward, Angew. Chem. 69, 50-51 /1957/). 6. A nátriumtartalmú vegyüiet összegképlete: (C29_3iH33_370;,_l |Na)n. 7. A vegyüiet jól oldódik etil-acetátban, kloroformban, metanolban és rövidszénláncú alkoholokban, rosszul oldódik vízben. 8. A vegyüiet kieselgel vékonyréteg-kromatográfiában FeCl3/H2S04 rendszerrel megfesthető. A reagenst a szokásos előírások szerint készítettük (v.ö. E. Stahl, Dünnschichtchromatographie, 2. kiadás, Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, 1967). 9. A vegyüiet antibakteriális hatását az 1. táblázatban foglaltuk össze. A találmány kiterjed továbbá új, a Streptomycetaceae családba tartozó mikroorganizmusokra is, amelyek szén- és nitrogénforrást, valamint ásványi anyagokat tartalmazó tápközegen tenyésztve az 1-9. pontok alatt felsorolt tulajdonságokkal és paraméterekkel jellemezhető vegyületet termelnek, ahol a tulajdonságok közül az 1. ábrán bemutatott IR-KBr-abszorpciós spektrum különös jelentőséggel bír. 1 2 A találmány szerinti eljárás szempontjából a Streptomyces nemzetségbe tartozó BA9 mikroorganizmus törzs különösen fontos. A törzs koncentrálását és izolálását a szokásos Actinomyceta-izolálási módszerrel végeztük úgy, hogy talajmintákat Petri-csészékben szélesztettünk, négy:hat hétig tenyésztettünk, majd az egyes kolóniákat átoltottuk (Williams, S.T. és Gross, T. ( 1971). Actinomycètes. In Methods in Microbiology 4, 295-334. Booth, C., (szerk.), London-New York, Academic Press). Az új Streptomyces törzset, laboratóriumi jele BA 9, 1984. augusztus 6-án DSM 3025 számon letétbe helyeztük a Deutsche Sammlung von Mikroorganismen, Griesbachstrasse 8., 3400 Göttingen, BRD letéti helyen. Ügy találtuk, hogy a találmány szerinti vegyületekhez jutunk, ha Streptomycetaceae családba tartozó megfelelő mikroorganizmusokat asszimilálható szén- és nitrogénforrást, valamint ásványi sókat tartalmazó tápközegen aerob körülmények között tenyésztünk, és a vegyületeket szokásos módszerekkel izoláljuk. A találmány szerinti eljárásban különösen a Streptomycetes BA 9 törzs (valamint mutánsai és variációi) alkalmazhatók. Ez a törzs az Actinomycetales nemzetségbe tartozó baktériumokhoz, a Streptomycetaceae családhoz, és a Streptomyces nemzetséghez tartozik, a talajból izoláltuk. A BA 9 törzs taxonómiai meghatározását a Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás (1974), valamint az International Journal of Systematic Bacteriology 16, 313-340 (1966) és a The Prokariotes 2, 2028- -2090 (1981) alapján végeztük. 1. Morfológia Jó spórázódást csak szervetlensó-keményítő-agaron (ISP 4. tápközeg összetételt lásd később) figyeltünk meg. Más tápközegeken (ISP 1 -3, és 5. tápközegek) kevés légmicélium, illetve csak szubsztrátmicélium képződött. ISP 1. tápközeg 10 g/1 D-mannittal kiegészítve (összetételt lásd később) Légmicéliumok (ISP 4. tápközeg, 28°C, 7 nap) Szín: 7 nap után szürke Spóralánc: spirál típusú Spórák: enyhén érdesek (elektronmikroszkóppal), hengeresek szélesség kb. 1,1- -1 pm, hosszúság kb. 1,4-1,6 pm. Szubsztrátmicéliumok Szín: vörösbarna, különösen az ISP 3. és 5. tápközegeken. Sejtfalanalízis I. sejtfaltípus, fő alkotóelemek LL-diamino-pimelinsav és glicin. 2. Fiziológia Hőmérsékletoptimum 28°C (ISP 1. tápközeg, 5 nap) ISP 7. tápközegen (tirozin-agar) 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
