193812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korrinoidok elválasztására
9 193812 6. példa 10 liter, 23 g B12-vitamint, 4 g III. faktor és 99,7 g inkomplett korrinoidot tartalmazó vizes sűrítményből kiindulva az 1. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a gyantán megkötött kobalaminokat nem együttesen, hanem szelektíven eluáljuk. Ezt úgy végezzük, hogy 5 liter DIAION HP 20 adszorbenst tartalmazó oszlopon 10 liter vizet — amely 10 tf% acetont tartalmaz és amelyben a pH-nak ammónium-hidroxiddal 9,5-re való beállítása után 2 g kálium-cianidot oldottunk — nyomatunk át alulról felfelé, 5 liter/óra sebességgel. Ezt követően az oszlopot 5 liter vízzel mossuk. Az eluátumot és a mosóvizet egyesítve, abból ismert módon takarmánykiegészítőként felhasználható III. faktor tartalmú terméket állítunk elő a következő módon: a lúgos, acetonos eluátumot és vizes mosóoldatot egyesítjük, 10%-os kénsavval pH=4 értékre állítjuk be, majd annyi vizet adunk hozzá, hogy aceton tartalma 5 tf% alatt legyen. Ezután 0,5 liter DIAION HP 20 gyanta oszlopon átáramoltatva azon adszorbeáltatjuk a III. faktort. Az adszorbenst 5 liter vízzel átmossuk, majd a III. faktort 1 liter 90 tf %os metanollal eluáljuk. Az eluátum 3,7 g III. faktort tartalmaz, 92,5% a hozam. Â metanol lepárlása, majd a vizes oldat porlasztvaszárítása után takarmánykiegészítőként hasznosítjuk a terméket. ,A 111. faktor eluálását és a vizes mosást követően a gyanta oszlopot 1,5 liter 0,1 N ecetsav oldattal mossuk, majd vízzel semlegesre mossuk. Az oszlopról a B12-vitamint 2 liter 70 tf%-os acetonos vízzel oldjuk le. Az így nyert oldatból a B,2-vitamint ismert módon aceton hozzáadásával kristályosítjuk. Hozam 19,3 g B12 -vitamin. A Bt2-vitamin termelés a kiindulási vizes sűrítményre vonatkoztatva 84%. 7 7. példa 1,5 m3 fermentléből az A) c) pontban leírtak szerint nyert 15 liter, 5 tf% metanolt tartalmazó vizes sűrítményt, amely 34,5 g B12-vitamint és 6 g III. faktort, valamint 149,6 g inkomplett korrinoidot tartalmaz, a 2. példában megadott módon dolgozunk fel azzal az eltéréssel, hogy a gyantán adszorbeált B12-vitamint és 111. faktort külön-külön oldjuk le a következő módon: a 6 liter Amberlite XAD 2 gyanta oszlopon 30 liter 30 tf% metanolt tartalmazó, 1 N nátrium-hidroxiddal pH=9,0-re lúgosított vizet — amelyben 0,01% kálium-cianidot oldottunk — áramoltatunk át 6 liter/óra sebességgel. Ezután átmossuk az oszlopot 6 liter vízzel. A mosóvizet egyesítjük az eluátummal. Ez az oldat 5,4 g III. faktort tartalmaz. A pH-t 10%-os sósavval pH 4-4,5 értékre savanyítjuk, majd annyi vizet adunk az oldathoz, hogy metanoltartalma 10 tf% alatt legyen. Ezután 1 liter Amberlite XAD 2 gyantaoszlopon átáramottatva adszorbeáltatjuk a III. faktort, az adszorbenst 5 liter víz-6 zel átmossuk, majd a III. faktort 2 liter 90%-os metanollal eluáljuk. A metanolt lepároljuk, majd a vizes oldatot porlasztva szárítva takarmánykiegészítő terméket nyerünk. A III. faktor elúciója és a vizes mosás után a gyanta oszlopot tovább mossuk vízzel mindaddig, míg az átfolyt lé semleges nem lesz. Ezután az adszorbensre a B12-vitamín leoldása céljából 2,5 liter 90 tf%-os metanolt nyomatunk fel, 10 perc állás után leengedjük az elátumot. A fenti műveletet még kétszer l-l liter 90 tf%-os metanollal megismételjük. Az egyesített eluátum 31,4 g B12-vitamint tartalmaz. A metanol lepárlása után nyert vizes oldatból hétszeres térfogatú aceton hozzáadásával ismert módon 31 g nyers B12-vitamint kristályt nyerünk, amely 28,9 g B12-vitamint tartalmaz. Ezt szintén ismert módon vízből átkristályosítva 30,2 g B12-vitamin kristályt nyerünk, amely megfelel a VI. Magyar Gyógyszerkönyv minőségi követelményeinek, B,2- -vitamin tartalma 96%. A hozam a kiindulási vizes sűrítményben levő mennyiség 84%-a. 8. példa 1000 liter fermentléből az A) b) pontban leírtak szerint tisztított és feltárt fermentlevet, amely 27 g B12-vitamint, 5 g III. faktort és 118 g inkomplett korrinoidot tartalmaz, a 3. példában megadott módon dolgozunk fel azzal az eltéréssel, hogy az inkomplett korrinoidok szelektív elúciója után a gyanta oszlopból a III. faktort 10%-os nátrium-hidroxiddal pH= =9,5-re lúgosított és 15 tf% acetont és 0,01% kálium-cianidot tartalmazó 30 liter vízzel eluáljuk, majd ezután 5 liter vízzel átmossuk az oszlopot. Az egyesített eluátum és mosóvíz 4,3 g III. faktort tartalmaz. A feltárt fermentlére vonatkoztatott III. faktor hozam 86%. A gyantaoszlopot a III. faktor elúciója és a vizes mosás után vízzel az átfolyt lé semlegességéig mossuk. Ezután a gyantán adszorbeált B12-vitamint 30 liter 70 tf%-os acetonnal leoldjuk. Az eluátumhoz azonos térfogatú acetont adunk a B12-vitamin kristályosítása céljából. A kivált nyers kristályt vízből ismert módon átkristályosítva 21,6 g kristályt nyerünk, amelynek B,2-vitamin tartatma 96% (20,7 g). A tisztított és feltárt fermentlé hatóanyagtartalmára vonatkoztatott B)2-vitamin hozam 76,8%. 9. példa Az A) c) pontban leírtak szerint nyert 10 liter vizes oldatból, amely 23 g B,2-vitamint és 4 g III. faktort, valamint 99,7 g inkomplett korrinoidot tartalmaz, az 5. példa szerinti szelektíven adszorbeáltatjuk az inkomplett korrinoidok mellől a B12-vitamint és a III. faktort, kis mértékben poláros 4 liter DIAION HP2MG adszorbciós gyanta oszlopon. A gyanta vizes mosása után 5 liter 0,02%-os kálium -cianidot tartalmazó, 10%-os nátrium-hidroxiddal pH=10,0-re lúgosított és 25 tf% metanolt tartalmazó vizet engedünk át az adszorbens oszlopon, majd 5 liter vízzel mossuk azt. 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
