193696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új SB 22484 antibiotikum-komplex előállítására
193696 F) A következő Rf értékek különböző kromatográfiás rendszerekben szilanizált szilikagél 60 F254 Merck lemezeket használva: Elúciós rendszer /v/v/v/__________Rf érték 1) NaH2P04/metanol 4/6 0'44 0,50 0,55 2) NaH2P04/metanol/acetonitril 4/5/1 0,52 0,57 0,63 3) 0,05M tetrabutil-ammónium--foszfát (pH 7,0): metanol 4/6 0,46 0,50 0,55 Kimutatás: UV fénnyel 254 nm-en Az SB 22484 antibiotikum mint antibakteriális szer különösen aktív olyan, fertőző betegségekért felelős baktérium törzsekkel szemben, amelyek általában nehezen gyógyíthatók (ilyen pl. a gonorrhea és az agyhártyagyulladás) . Mint már említettük, a találmány szerinti antibiotikum aktív Neisseria törzsekkel szemben, eléggé aktív Steptococcus, Ureaplasma, Mycoplasma és Hemophylus törzsekkel szemben, míg csaknem inaktív Staphylococcusokkal és a közönséges Gram-negatív baktériumokkal szemben, amilyen a Proteus, Escherichia és Pseudomonas. A találmány szerinti vegyületek antibakteriális aktivitása in vitro standard hígításos próbával mutatható ki. A Staphylococcusok esetében Iso-Sensitest húslevest (Oxoid), a Streptococcusok esetében Todd-Hewitt húslevest (Difco) használunk; a Neisseria törzseket 1% Iso-Vitalex-et (BBL) tartalmazó OC agar alapon (Difco) tenyésztjük, a Hemophylus törzseket pedig 1% Iso-Vitalex-et (BBL) és 1% hemoglobint (Difco) tartalmazó OC agar alapon (DIFCO). A húsleves tenyészeteket úgy hígítjuk, hogy a végső inokulum kb. 104-10s telep-képző egységet tartalmazzon milliméterenként (CFU/ /ml). Minimális gátló koncentrációnak (MIC) azt a legalacsonyabb antibiotikum koncentrációt tekintjük, amely 18-24 órás inkubálás után 37°C-on már kiküszöböli a látható növekedést. A Neisseria törzseket C02-ban dús atmoszférában tenyésztjük. Az SB 22484 antibiotikum in vitro aktivitás-spektrumát a következő táblázatban foglaljuk össze. IV. IV. táblázat Az SB 22484 antibiotikum in vitro antibakteriális aktivitása Törzs______________________MIC (pg/ml) 9 S. pyogenes C 203 SKF 13400 8 S. dysgalactiae ATCC 9926 8 S. pneumoniae UC 41 L 44 4 H. influenzae ATCC 9795 b típus 32 H. influenzae ATCC 9332 d típus 32 H. influenzae L 99Q+ 32 M. gallisepticum 9/6 Weybridge L 431 4 N. caviae ATCC 14659 0,5 N. gonorrhoeae NCTC 8254 0,5 N. gonorrhoeae L 997+ 2 N. gonorrhoeae“1“ L 1596++ 2 N. gonorrhoeae“1“ L 1599+++ 1 N. meningitis ATCC 13077 (A) 4 N. meningitis ATCC 13090 (B) 1 N. meningitis ATCC 13102 (C) 2 N. meningitis ATCC 13118 (D) 1 N. meningitis ATCC 13804 1 Az L jelzés a bejelentő saját törzsgyűjteményének számaira vonatkozik. + Klinikailag izolált törzsek, amelyeket a bejelentő saját törzsgyűjteménye számaival azonosítunk. ++Spectinomycinre (MIC ilyen körülmények között 128-nál nagyobb) rezisztens, klinikailag izolált törzsek. +++Klinikailag izolált, béta-penicillanázt termelő törzsek (ilyen körülmények között 50- -nél magasabb MIC-vel rendelkező penicillinre rezisztensek). Az Ureaplasma urealyticum-ra vonatkozó aktivitást úgy vizsgáljuk, hogy a mikroorganizmust előzetesen a következő összetételű táptalajon tenyésztjük: PPLO húsleves kristályibolya nélkül (Difco) 80 ml 1NHC1 0,9 ml lószérum (Sclavo) 10 ml 50% karbamid (C. Erba RP) 1 ml 0,2% fenolvörös 1 ml kb. pH 6-ra beállítva. À minimális gátló koncentrációt (MIC) kémcsövekben határozzuk meg, a kétszeres sorozathígításos módszer szerint (koncentráció-tartomány: 0,008—128 pg/ml). Kémcsövenként 1 ml-es térfogatokat veszünk és ezt 20-24A-s húsleves-tenyészetből származó 102-103 színváltoztató egységgel (ccu) oltjuk be. A kémcsöveket 37°C-on inkubáljuk. MIC végpontnak azt a legalacsonyabb antibiotikum koncentrációt tekintjük, amely megakadályozza a színváltozást, abban az időpontban mérve, amelyben a kontroll tenyészet pH 7,8-nak megfelelően színváltozást mutat (ezt úgy határozzuk meg, hogy a tenyészet színét összehasonlítjuk ugyanazon, különböző pH értékekre beállított táptalaj színével). Ez a változás kb. 24A-s inkubálás után következik be, ha kb. 102-103 ccu/ml aktivitású inokulumokat használunk. Az inokulum nagyságát a következők szerint határozzuk meg: az inokulumként használt húsleves tenyészetek 10-szeres sorozathígításait húsleveshez adjuk hozzá; a ccu/ml értéket a legalacsonyabb, színváltozást mutató hígítás alapján számítjuk ki. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 55 6
