193628. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos 7-(dimetil-amino-metilén-amino)9a-metoxi-mitozán előállítására
193628 sen 9,6 ml N,N-dimetil-formamid-dimetil-acetált adtunk négy egyenlő, 2,4 ml térfogatú részletben, a reagáltatás kezdetén, majd 18, 21, végül 23 óra elteltével. A szuszpenziót 41 órán át kevertük 50°C körüli hőmérsékleten. Az oldószert és a reagens feleslegét csökkentett nyomáson lepároltuk, és ekkor sötétzöld maradékot kaptunk. Ennek vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata (oldószer diklórmetán és metanol 20:1 arányú elegye) azt mutatta, hogy mitomicin C nem mutatható ki, viszont két új, zöldszínű komponens van jelen (R/= =0,16 és 0,22). A fő komponenst (R/=0,16) gyorskromatográfiás módszerrel különítettük el, eluálószerként diklórmetán és metanol 20:1 arányú elegyét használva. A kapott 340 mg (51,5%) zöldszínű, szilárd anyagot dietiléterben oldottuk, majd hexán hozzáadásával kicsaptuk. így 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -N10-(dimetil-amino-metiüdén) -9a-metoxi-mitozánt kaptunk sötétzöld, amorf por alakjában. MMR spektrum (d5-piridin) delta-értékek: 2,18 (szingulett, 3H), 2,70 (széles szingulett, 1H), 2,76 (szingulett, 3H), 2,82 (szingulett, 3H), 2,86 (szingulett, 6H), 3,22 (szingulett, 3H), 3,30 (széles szingulett, 1H), 3,60 (dublett, J= 12 Hz), 4,12 (dublettekből álló dublett, 1H, J=10 Hz, 4 Hz), 4,43 (dublett, 1H, J= = 12 Hz), 4,90 (széles szingulett, 1H), 5,10 (triplett, 1H, J = 10 Hz), 5,52 (dublettekből álló dublett, 1H, J=10 Hz, 4 Hz), 7,85 (szingulett, 1H), 8,64 (szingulett, 1H). Infravörös spektrum (káliumbrómid-pasztilla) vmű;rértékek: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060 cm'1. Ultraibolya spektrum (víz) A,max-értékek: 390 és 244 nm. Analízis a C2,H28N605 képlet alapján: számított: C56,71%: H 6,08%, N 18,90%; talált: C 56,20%, H 6,28%, N 17,88%. 2. A következőképpen állítottunk elő 7- (dimetil- amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt: 600 mg (1,35 mM) 7- (dimetil-amino-metilidén-amino) -N10- (dimetil-amino-metilidén) - -9a-metoxi-mitozán 10 ml metanollal készült oldatához 2,2 ml (10,8 mM) amino-difenil-metánt adtunk, és a kapott oldatot 4 órán át kevertük 54°C-on. A reakció előrehaladását vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal ellenőriztük, oldószerelegyként diklórmetán és metanol 90:10 arányú elegyét használva. A 4 órás reakcióidő leteltével a kromatogramból eltűnt a kiindulási anyag (R/-=0,35), és helyette egy új zöld zóna (Rf=0,29) jelent meg fő komponensként. Az oldatot csökkentett nyomáson betöményítettük, és a visszamaradó sűrű folyadékot gyorskromatografálásnak vetettük alá 25 g szilikagélen, eluálószerként diklórmetán és metanol 20:1 arányú elegyét használva. A zöldszínű komponenst tartalmazó frakciókat (Rf=0,29) egyesítettük, vízmen tes nátriumszulfáton szárítottuk és bepárol tűk. 215 mg (41%) 7- (dimetil-ammo-meti 3 1 idén-aminő) -9a-metoxi-mitozánt kaptunk amorf szilárd anyag alakjában. NMR spektrum (d5-piridin) delta-értékek: 2,18 (szingulett, 3H), 2,70 (széles szingulett, 1H), 2,80 (szingulett, 3H), 2,88 (szingulett, 3H), 3,08 (széles szingulett, 1H), 3,24 (szingulett, 3H), 3,56 (széles dublett, 1H, J= 12 Hz), 4,00 (dublettekből álló dublett, 1H), 4,44 (dublett, 1H, J=12Hz), 5,06 (triplett, 1H, J= = 10 Hz), 5,56 (dublettekből álló dublett, 1H, J=10 Hz, 4 Hz), 7,58 (széles szingulett, 2H), 7,88 (szingulett, 1H). Infravörös spektrum (káliumbromid-pasztilla) vmax-értékek: 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, 1535, 1050 cm'1. Ultraibolya spektrum (víz) ^max-értékek: 390 és 226 nm. Analízis a C18H23N505 képlet alapján: számított: C 55,48%, H 5,91 %, N 17,98%; talált: C 54,83%; H 5,67%; N 16,90%. A 896 963 sz. belga szabadalmi leírás 15. példája szerinti eljárás N,N-dimetil-klór-metilidén-imínium-klorid 0,5 M oldatát állítottuk elő oly módon, hogy 915 mg (12,5 mmól) dimetilformamid 25 ml kloroformmal készült oldatához 1,57 g (12,5 mmól) oxalil-kloridot csepegtettünk 0°C-on, majd a reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten kevertük. 334 mg (1 mmól) mitomicin C 5 ml dimetilformamiddal készített oldatát 3 ml dimetilformamidban szuszpendált 36 mg (1,5 mmól) nátriumhidridhez adtuk. Az oldatot 20 percig kevertük szobahőmérsékleten, majd -40 és -50°C közötti hőmérsékletre hűtőttük, és 3 ml (1,5 mmól) dimetil-klór-metilidén-imínium-klorid-oldatot adtunk hozzá, amelyet a fentiek szerint készítettünk el. A reakcióelegyet 10 percig kevertük -40°C-on, további 18 mg (0,75 mmól) nátriumhidridet adtunk hozzá, és 1 órán át -40°C-on tartottuk. Ezután diklórmetánnal hígítottuk, szűrtük, a szűrletet bepároltuk, és a maradékot vékonyréteg-kromatografálásnak vetettük alá szilikagélrétegen, eluálószerként 10% metanolt tartalmazó diklórmetán alkalmazásával. A fő zöld sáv extrakciójával 78 mg amorf szilárd anyagot kaptunk, termelés 43%, a viszanyert mitomicin C figyelembevételével. Az amorf termék MMR spektruma és a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatnál mutatott viselkedése megegyezett a fentiek szerint előállított 7- - (dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánéval. A találmány szerint az amorf 7-(dimetil-amino-metilidén-amino) -9a-metoxi-mitozánt kristályos formává alakíthatjuk, ha acetonban és/vagy etanolban oldjuk, és a kapott oldatot éterhez adjuk. Előnyösen az oldatot hoszszabb idő, például 20 perc alatt adjuk hozzá az éterhez. A kristályos 7- (dimetil-amino-metilidén-amino)-9a-metoxi-mitozánt úgy is előállít-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
