193620. lajstromszámú szabadalom • Eljárás allil-amin-származékok előállítására
193620 Hasonló módon eljárva állíthatjuk elő a 2- (3-furanil) -a Ilii-amint. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű allil-amin vegyületek dopamin ß-hidroxiläz (DBH) inhibitorok, ezt egy mechanizmus bizonyítja, amelyben fontos szerepe van az inaktivációs időnek és a koncentráció-függésnek. Ennek alapján az (1) általános képletű vegyületek értékes terápiás szerek, amelyek a magas vérnyomás kezelésében hatásosak. Az (I) általános képletű vegyületek dopamin ß-hidroxildz gátló tulajdonságai standard, jól ismert módszerekkel könnyen meghatározhatók. Ilyeneket írnak le a 4 415 191 számú USA-beli szabadalmi leírásban. Például, annak meghatározását, hogy vajon a DBH gátlás idő függő kinetikájú-e, a következő módszerrel szemléltetjük: a DBH kiváltott enzimatikus oxidációt vizes oldatban, molekuláris oxigén, valamilyen elektrondonor, így például aszkorbát, valamint az enzim számára pH=5 értéknél szükséges kofaktorok jelenlétében, 20-40°C, előnyösen 37°C hőmér-I. t 3 sékieten határozzuk meg. A vizsgálandó vegyületet hozzáadjuk a kívánt koncentrációban és a rendszert inkubáljuk. Különböző időintervallumokban kiveszünk alikvot mennyi- 5 ségeket és megmérjük a DBH aktivitását szubsztrátként triamint alkalmazva. A reakciót az oxigénfelvétel mérésével követjük, polarográfiás elektród és oxigén monitor alkalmazásával. S May és társai (J. Bioi. Ctiem. 256, 10 2258 (1981) ) módszere szerint. A DBH inaktivációjára vonatkozó inhibiciós konstansokat minden vegyület esetében módszerekkel, mint amilyen például Kitz és Wilson (J. Biol. Chem. 237, 3245 (1962) ) mód- 15 szerre, határozzuk meg. Az I. táblázatban látható vegyületeket a fent leírt módszerrel vizsgálva, a DBH inhibiciós aktivitása az inkubációs idő függvényében nő. Az aktivftáscsökkenés kezdeti sebessége az inhibitorkoncentrá- 20 c:ó növekedésével nő. Az I. táblázat adatai azt mutatják, hogy a 2-(2-tienil)-allil-amin hatásos, ezt bizonyítja a gyors inaktivitációs sebesség (K'naci) és az alacsony inhibiciós konstans (Kj)ilazat 4 DBH inhibiciós aktivitás — in vitro Vegyület KI (mM) K. inact (perc ”1) 2-(2-furil)-allil-amin 8 0,004 II. táblázat Vérnyomás csökkentő aktivitás — in vivo Vegyület Do’zis mg/kg Maximalis %-os változás a’tlagos vérnyomás 2-(2-furil )-al lil-atnin 10 (i.p.) 18 30 (i.p.) 32 A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivo vérnyomáscsökkentő ké pességét ismert módon határozhatjuk meg, magas vérnyomású patkányok felhasználásával. A vizsgálandó vegyületet intraperitoneális (i.p.) vagy orális (p.o.) módon adhatjuk be a patkányoknak és folyamatosan ellenőrizzük a vérnyomásukat. Mivel a pirokatechin-aminok szintézisében a DBH a fő enzim, az várható, hogy egy inhibitor jelenléte csökkenti a keletkezett pirokatechin-aminok menynyiségét, és így nyilvánul meg a magas vérnyomást csökkentő hatás. A vizsgálati eredmények erre vonatkozóan a II. táblázatban 55 láthatók. Ezeknek az eredményeknek és egyéb ismert, a dopamin ß-hidroxiläz inhibitorok jellemzésére szolgáló standard laboratóriumi módszerek, valamint standard toxicitási vizsgQ gálatok és a magas vérnyomással szemben mutatott aktivitás meghatározására szolgáló standard farmakológiai vizsgálatoknak segítségével, végül az eredményeknek ismert magas vérnyomás elleni szerekkel való összehasonlítása alapján, könnyen meghatároz- 65 hatjuk a találmány szerinti eljárással eiőái-3
