193615. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új optikailag aktív tri-azolil karbino-származék és ilyen vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193615-szulfonsavat, majd egy éjszakán át állni hagyjuk, vízbe öntjük és metilén-kloriddal extraháljuk. A szerves fázist kétszer vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban betöményítjük. Ily módon nyerjük a d( + ) -kámfor-10-szulfonsav- [2-(4-klór-fenoxi-metil ) -3,3-dimetil-2-hidroxi-1 -butil] -észter diasztereomerjeinek keverékét (18 g) viszkózus olaj formájában, amelyből az egyik diasztereomer (o.p.-ja 103°C) részben kikristályosodik. HPLC segítségével (szilikagél, hexán-izopropil-éter) választjuk el a diasztereomereket, amikor is a következő vegyületeket nyerjük: a) 1. frakció: 5,2 g termék színtelen olaj formájában, forgatóképessége (a)£°=+21,6° (CHCI3, c=0,67) és b) 2. frakció: 5,0 g termék, o.p-ja 103°C, forgatóképessége (a)4°=+32,8° (CHClj, c= = 1,02). 2. lépés /(III) képletű vegyület/ 5,2 g, előző 1. frakció szerinti vegÿülëtet (d( + )-kámfor-10-szulfonsav- (2-(4-klór-fenoxi-metil)-3,3-dimetiI-2-hidroxi-1 -butil J -észter) 3 g (43 mmól) 1,2,4-triazollal és 3 g (21 mmól) kalcium-karbonáttal 60 ml acetonitrilben elkeverünk és visszafolyatás mellett 8 órán át rpelegítjük. Ezután a reakciókeveréket vízbe öntjük, metilén-kloriddal extraháljuk és a szerves fázist betöményítjük. A kapott nyersterméket oszlopkromatográfiásan tisztítjuk (kloroform/ecetsav-etil-észter- 3:1). Tisztítás után 2,2 g (68%) (—)-2-(4- -klór-fenoxi-metil) -3,3-dimetil-1 - ( 1,2,4-triazol -1 -il ) -2-butanolt nyerünk, o.p.-ja 57°C, forgatóképessége (a)J°=—111,4° (CHCI3). 2. PÉLDA / (V) képletű vegyület/ 1. lépés Az 1. példa 1. lépésében leírtak szerint járunk el. 2. lépés /(V/a) képletű vegyület/ Az 1. példa 1. lépésében nyert 2. frakció szerinti vegyület (d(-j-)-kámfor-lO-szulfonsav- [2- (4-klór-fenoxi-metil) -3,3-dimetil-2- -hidroxi-1 -butil] -észter) 8,0 g-ját 5 g (72 mmól) 1,2,4-triazollal és 5 g (35 mmól) kálium-karbonáttal 80 ml acetonitrilben elkeverjük és visszafolyatás mellett 8 órán át melegítjük. Ezután a reakciókeveréket vízbe öntjük, metilén-kloriddal extraháljuk és a szerves fázist betöményítjük. Az olajos maradékot ciklohexánban oldjuk, az oldatból a szim-7 metrikus triazol-származék kikristályosodik (1,2 g, o.p.-ja 220°C), amelyet szűréssel elválasztunk. A szűrletet vákuumban betöményítjük és az olajos maradékot petrol-éterből átkristályosítjuk. Ily módon 3,2 g (57%) ( + )-2- (4-klór-fenoxi-metil ) -3,3-dimetil -1 - ( 1,2,4- -triazol-1 -il)-2-butanolt nyerünk, o.p.-ja 57°C, forgatóképessége (a)»°=-|-l 13° (CHCI3). Biológiai, példa Szterol-szintézis-gátló hatás Candida albicans esetében Csíra-tenyésztés és inkubálás a hatóanyagokkal: 250 ml szűknyakú Erlenmayer lombikba 95 ml Kimming-féle tápoldatot teszünk és vattadugóval szorosan lezárjuk. A Kimming-féle tápoldat összetétele a következő: 8 Húsleves tápoldat (Difco 003) 13 g Glicerin p.a. 5 g Bacto-pepton (Difco 0118) 8,6 g Glükóz 10,6 g NaCl p.a. 9 g Sótalanított víz 1000 g Sterilizálás után (15 perc, 120°C) a lombikokat 48 órás, Kitnming-ferde csövekben nyert tenyészettel beoltjuk, steril fiziológiás sóoldattal (NaCl) öblítjük és a tenyészetek felületét üvegspatulával megdörzsöljük. Ezután a csiraszüszpenziót gézen szűrjük és a lombikokból nyert szűrletből 5 ml Kimming-közegre számítva 5 x 102 * * * * 7 mennyiségű csírát állítunk elő és ezeket a lombikokba adagoljuk. A csíraképes részecskék száma 1 ml tápoldatra számítva kb. 5 x 10?/ml. Beoltás után a lombikokat rázószekrénybe tesszük (Clim-O-shake, A. Kühner, Basel) és 28°C hőmérsékleten 95 ford/perc mellett rázatjuk. A hatóanyagokat — 1 ml etanolban oldva — közvetlenül a tenyésztés után adagoljuk. A kontroli-lombikba 1 ml etanolt tettünk. A Candida-kultúrákat 48 órán át tenyésztjük, majd a lombikok tartalmát centrifugáló edénybe tesszük át és 15 percig 5000 ford/perc mellett centrifugáljuk. A centrifugacsöveket fiziológiás NaCl oldattal átmossuk és a kiülepedett csírákat a további felhasználáshoz kldroform/metanol elegyben (2:1) felvesszük. A szterol izolálását extrakcióval az Ann. Phytopathol. 10, 1980, 45 irodalmi helyen leírtak szerint végezzük. A kvantitatív analízist gázkromatográfiásán a Phytochem. 18, (1979), 445 irodalmi helyen leírtak szerint végeztük. A kapott eredményeket a következő táblázatban foglaljuk össze. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 5
