193607. lajstromszámú szabadalom • Eljárás természetes vagy mesterséges megtermékenyítésre alkalmas ivartermékek előállítására emlős állatokban
193607 8 míg a szubordinált hímek fiziológiásán és reverzibilisen oligospermiásak. Esetünkben a vezérhímtől gyűjtött és spermabankban tárolt sperma mellett kifejezetten inszeminálás céljából szükség volt a szubordinált 4 hím (valamennyi ivarérett) spermájára. Mindegyik állatot a kezelés megkezdése előtt narkózisban elektromos úton ejakuláltattuk. Az ejakuláturriokat sűrűség és motilitás szempontjából mikroszkóposán értékeltük, majd mélyhűtési ( —196°C-os) próbának vetettük alá. Előző spermatológiai munkáinkban azt tapasztaltuk, hogy mikroszkóposán nehezen értékelhető defektes spermiumok a mélyhűtési körülményeket nem élik túl. A mélyhűtés után kapott kedvező spermakép a spermiogenézis rendben való lefutását mutatta. A vizsgált hímeknél a kezelések előtti ejakulátumok vizsgálata fiziológiás oligospermiát igazolt. Ezek után heti egy alkalommal a 60—90 kg közötti hím csimpánzoknak 1 ml fiziológiás nátrium-kloridban oldott 100 pg, D-Phe6, Gin8, desGIy10—GnRH etil-amidot adtunk intramuszkulárisan, sűrített levegős belövési technikát alkalmazva. Az első kezelést követő 4. héten narkózisban, elektromos úton nyert ejakulátumokban 40—60%-os arányban fiatal spermium-formálódási alakokat regisztráltunk, az ejakulátumok mélyhűtési próba után 10% alatti motilitásúak voltak. Az első kezelést követő 60 nap múlva narkózisban, elektromos úton nyert ejakulátumokban a defektes spermiumok száma 30% alá süllyedt, a motilitás meghaladta a 60%-ot. Az ejakulátumok kvalitatív és kvantitatív tulajdonságai megegyeztek a vezérhímtől nyert, valamint a szakirodalomban közölt értékekkel. Az ejakulátumok 1:1 arányú hígítása után a mélyhűtési próba pozitív volt, a 60%-os motilitás mindössze 45%-ra csökkent. Az ilyen minőségű sperma inszeminálási célra akár frissen, akár mélyhűtve messzemenően alkalmas. Ezzel az eljárással elértük azt a célt, hogy szubordinált hímekből spermabankban tárolható, megfelelő mennyiségű és minőségű, megtermékenyítésre alkalmas ondót nyerjünk. 8. példa Szezonális oligospermiában lévő bölénybika spermiogenézisének beindítása inszeminálás és mélyhú'téses tartósításra alkalmas ejakulátum gyűjtése céljából Állatkerti tulajdonban lévő, kb. 700 kg súlyú európai bölénybikától május hónapban, narkózisban eletromos úton spermamintát vettünk, és megállapítottuk, hogy szezonális indokú oligospermia állapotában van. Ennek tünetei a következők voltak: a spermaminősítésben használatos 1500X-os nagyítású mikroszkóp látóterében a spermiumszám 5—20, a defektes spermiumok száma 75—80%, az ejakulátum sűrűsége 0.5 volt. Az ilyen minőségű sperma megtermékenyítésre alkalmatlan. Ezek után heti 2 alkalommal 200—200 pg dózisú D-Phe6, Gin8—GnRH analóggal kezel7 tük az állatot intramuszkulárisan, sűrített levegős belövési technika alkalmazásával. A kezelés megkezdésétől számított 55. napon narkózisban, 1 óra időeltolódással két alkalommal ejakuláltattuk az állatot. A két ejakulátumot egyesítettük; sűrűsége 4, motilítása 55%-os volt. Az így kapott spermát mélyhűtöttük, majd ellenőriztük a mélyhűtés hatására bekövetkezett motilítás-csökkenést. Ez mindössze 5%-os volt. Ezzel az eljárással a tenyészállat spermiogenézisét sikerült úgy beindítani, hogy a megtermékenyítésre használhatatlan ejakulátum helyett igen jó minőségű, akár frissen, akár mélyhűtés után több (14 db) nőstény inszeminálására alkalmas spermát nyertünk. 9. példa Spermiogenézis beindítása szezonális oligospermiában lévő vörös rókán (Vulpes vulpes) 4llatkertben tartott, szezonális oligospermiában lévő vörös róka hímek spermiogenézisét kíséreltük meg beindítani azzal a céllal, hogy nagyüzemi tenyésztésben lévő nemes ezüst és kék rókákat inszeminálhassunk különleges és nagyértékű hidrid prémek előállítása céljából. A szakirodalomban ismert az a tény, hogy a rókák valamennyi alfaja egy évben csak egyszer ivarzik, és ezen az egy iva záson kívül mindkét nem gonádjai teljesen inaktívak. Az egyes alfajok ösztrusza között több hónap az eltérés (vörös róka január, kék róka április-május). A vizsgálatok eredményeit a szezonális ösztruszban lévő populáció spermaképéhez hasonlítottuk, melynél az átlagos ejakulátum mennyiség 2 ml, a sűrűség 3 és a motilitás 50—60%-os volt. Ezt fogadtuk el fiziológiás értéknek. A vizsgálatok során 5 db 8 kg átlagsúlyú iva'érett vörös róka kant április hónapban kezeltünk heti két alkalommal 1, 5, 10, 50 pg dózisú D-Phe6, Gln8-GnRH analóggal hét héten át. A kezelés kezdetét követő 3. héten spermamintát vettünk. A mintákban a spermit m-szám a fiziológiás értéknek kb. 60— 70%-a volt, a degenerált spermiumok száma meghaladta a 40%-ot. A defektes alakok döntő többsége fiatal formálódású volt (nyakrészi középrészi plazmacsepp). A kísérlet kezdetétől eltelt 7. hét után az állatokat narkózisbar ismét ejakuláltattuk; valamennyitől eredményesen gyűjtöttünk ondót, amelynek térfogata ejakulátumonként 1,2 ml és 3,1 ml között változott, a sűrűség 3-as, a motilitás 65%-os vol:, számszerűen lényegesen meghaladta a f ziológiás mennyiséget. (A hímek el voltak zárva a nőstényektől, így kopulációs ürítésre nen volt lehetőségük.) A spermamintákat minőségük szerint csoportosítottuk, majd mé'yhütöttük. A hígítás és mélyhűtés után, a —196°C-on tárolt sperma motilítása a viszszaolvasztást követően 45%-os volt. A mélyhűtött sperma felhasználásával kék rókáknál normális vemhességet értünk el GnRH ovi láció programozás (lásd: 17. példa) és ins'.eminálási technika mellett. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
