193591. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dihidropiridazinon-származékok, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193591 Az 1. példa szerinti vegyidet csökkentette a 2-piridil-etil-amin indukálta hörgőszükületet. A vegyület küszöb dózisa 3,16 x 10“8 mól/ /kg volt. Az 1. példa szerinti vegyület mennyisége, amely 50%-kal csökkentette a 2-piridil-etil-amin okozta hörgőszűkületet (ED50) 3,9 x x I0~7 mól/kg volt; in vivo anti-bronchoconstrictor aktivitást tapasztaltunk. In vitro vérlemez aggregáció gátlás A plazmát az alábbiak szerint állítottuk elő. 6 egészséges önkéntes vérét 3,8 vegyes% trinátrium-citráttal (9 rész vér : 1 rész citrát) kevertük. A mintákat 150 g-vel 10 percen keresztül centrifugáltuk és a vérlemezkéket tartalmazó plazma-felülúszót (PRP) eltávolítótok. A koncentrációt a PRP-ben 300 ± 50 x x 10~9/l vérlemezkére a szervezetből származó vérlemezkében szegény plazmával állítottuk be. Az 1. példa szerinti vegyület 40 pg/ml oldatából kivett 25 pl-t Payton Aggregometer-ben 3 percen keresztül 225 pl PRP-vel inkubáltuk. Kontroll oldatként adott pH-jú és tonicitású oldatot és 0,9 vegyes% nátrium-klorid-oidatot készítettünk. 3 perc elteltével 25 pl adenozim-difoszfát oldatot adagoltunk, mindegyik oldathoz 20 mikromól koncentrációban. Az aggregációs hatás 3 perc alatt elérte a maximumát. Az eljárást különböző aggregáló szerekkel megismételtük: 100 pg kollagén; 100 mikromól adrenalin vagy 5 mg/ml arachidonsav az adenozin-difoszfát helyett. A különböző aggregáló szerekkel kiváltott aggregációt mindegyik donor vérlemezein mértük. Az eredményeket vizuálisan mértük; Payton aggregométert és fél-kvantitatív fénytranszmissziós vizsgálatokat végeztük 3 perccel az indukálószer adagolása után. Az adenozin-difoszfát, az arachidonsav, kollagén és az adrenalin oldatokkal indukált vérlemezke aggregációt az 1. példa szerinti vegyület 5 pg/ml végső koncentrációval gátoltuk. A tesztelendő vegyületből hígítási sorozatot készítettünk és így vizsgáltuk az adenozin difoszfát indukálta aggregáció gátlását. A második aggregációt az 1. példa szerinti vegyület 0,5 pg/ml mennyiségével teljesen gátoltuk. A találmány szerinti vegyületek a terápiás dózisnál százszor nagyobb mennyiségben kutyáknak orálisan adagolva sem mutattak toxikus hatást. 1. példa 6- [4- (N3-metil-Nz-cianoguanidino) -fenil] - -5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinon elő - állítása a) 2,0 g (0,0098 mól) 6-(4-aminofenil)-5-metil-4,5-dihidro-3(2H) -piridazinon és 2,4 g (0,01 mól) difenil-ciano-imino-karbonát 15 ml vízmentes dimetil-formamidban elkészített oldatát 6 órán keresztül 115—120°C hőmérsékleten keverjük. Ezután további, 0,6 g (0,0025 6 9 mól) difenil-ciano-imino-karbonátot adagolunk és az oldatot még 2 órán keresztül melegítjük. Az oldószer csökkentett nyomáson történő eltávolítása után barna színű párlási maradékot kapunk, melyet forró etanollal mosunk és vizes dimetil-formamidból történő átkristályosítás után 1,5 g súlyú 6- [4-/(N2-ciano)-íenoxi-form amid ino/-fenil ] - -5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinont ka - punk Olvadáspont: 164—165°C. A kapott terméket adott esetben acetonitrilből is átkristályosíthatjuk. b) 1,5 g (0,0043 mól) fenti formamidin és metilamin 50 ml etanolban elkészített 33% os oldatának keverékét 3,5 órán keresztül forráshőmérsékleten keverjük. A kapott oldalot csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk és a párlási maradékot forró etanolban oldjuk. Aktív szenes derítés után az oldatot vízzel kezeljük és hidegre hűtve 1,0 g súlyú cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspont: 264—265°C. 2 példa 6 [4- (N3-metil-N2-cianoguanidino) -fenil] - -5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinon előállítása a) 4 g 6-(4-aminofenil)-5-metil-4,5-dihidro -3(2H)-piridazinon 25 ml vízmentes piridinben elkészített oldatához 5,75 g dimetil-ciano-ditio-imino-karbonátot adunk és a keveréket 3 órán keresztül forráshőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután csökkentett nyomáson közelítőleg fél térfogatra pároljuk, etanollal hígítjuk és 3,85 g szilárddá dermedt terméket kapunk. A szűrletet állni hagyjuk és eldörzsöíés után további 1,42 g súlyú szilárd anyagot kapunk. A szilárd részecskéket egyesítjük és 60 ml térfogatú, kevés vizet tartalmazó forró piridinben oldjuk. Az oldatot szűrjük és bepároljuk, így iszapot kapunk, melyet acetonnal hígítunk és állni hagyjuk. Fentiek szerint eljárva 4,02 g 6-[4- - ( N ciano-S-metil-izotioureido) -fenil] -5-metil-4,5 dihidro-3(2H)-piridazinon kristályokat kapunk. Olvadáspont: 231—232°C (bomlik). b) 600 ml térfogatú 33% metil-amint tartalmazó etanolhoz 48 g 6- [4- (N-ciano-S-metil-iZotioureido)-fenil] -5 - metil - 4,5 -dihidro - -3(2H)-piridazinont adunk, miközben a reakcióelegyet keverjük. Az eljárás során a reakcióelegyet 2 órán keresztül forráshőmérsékleten tartjuk, majd hidegre hűtjük és szűrés után 32 g cím szerinti vegyületet kapunk, melyet vizes dimetil-formamidból átkristályosítva 270—272°C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapunk. A kapott vegyületet vékonyréteg-kromatográfiásan és magmágneses rezonancia spektroszkópiával vizsgálva az 1. példa szerinti vegyületet azonosítjuk. 3. példa 6- [4- (N3-etil-N2-cianoguanidino) - fenil] - -5- netil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinon előállítása 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
