193579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leucin-származék és az ebből képzett gyógyszerkészítmény előállítására
c) Glicerin-aszparr yin-agar Növekedés: jó. Telepek: vékony, kiszélesedő. Légmicélium: bársonyos, világos rózsaszín-barna (R4ec: Grayish Yellowish Pink). Telepek hátoldala: narancsszínű (Pr. Oc-3- -m(r)). Oldható pigment: halványrózsaszín-barna. d) Élesztő-maláta-agar Növekedés: jó. Telepek: vékony, durva. Légmicélium: bársonyos, vörösbarna (4ge: Light Grayish Reddish Brown 45). Telepek hátoldala: sárga (Pr. Coo-4-5) és sötétbarna (Pr. Oc-5-r). Oldható pigment: nagyon halvány-sárgásbarna. II. Agar-tenyészetek 62 nap után, 28°C-on (kettősmeghatározás). a) Zabliszt-agar Növekedés: jó. Telepek: vékony, kiszélesedő. Légmicélium: porszerü, bársonyos, fahéjszínű (R-4ie: Light Brown (57) — Cork Tan) széles, világosabb szegéllyel (R. 5gc: Light Reddish Brown (4.2) — Peach tan). Telepek hátoldala: Sárgásbarna okkersárgával (Pr. Çoo-3-a) szegély, enyhén szürke, a központ felé világosabb (Pr. Oc-4-r). Oldható pigment: világos okkerbarna. b) Keményítő-só-agar Mint a zabliszt-agaron, azonban erősebb szürkésbarna hátoldal (Pr. Oc-6-c) és a keresztmetszetek végén sötétbarna foltokkal és gyűrűkkel. c) Glicerin-aszparagin-agar Mint a keményítő-só-agaron, azonban halványabb, világosdrapp (5ec: Grayish Yellowish Pink 32 — Dusty Peads). Hátoldal: okkersárga (Pr.: Coo (=Cr)-4-b) a központban világosabb. Oldható pigment: nincs. d) Élesztő-maláta-agar Növekedés: közepes. Telepek: csaknem mint a zabliszt-agaron, azonban nagyon keskeny, halványszürke peremmel. Hátoldal: sötétsárga (Pr. Coo-4-b) a szegély közelében sötétbarna. Oldható pigment: jelentéktelen. III. Melanoid pigmentek Pepton-élesztőextrakt-agar: 24 óra után negatív, 48 óra után pozitív. Tirozin agar: 24 óra után pozitív, 48 óra után pozitív. IV. A spórázó légmicélium morfológiája Metszet: Spira-Retinaculum Apertum. Elágazás módja: szimpodiális. Spirálok gyakran szabálytalanok, legfeljebb 5 csavarulat és különböző átmérők. V. Szénforrás hasznosítás Az alábbi szénforrásokon egyáltalán nem vagy csak nyomokban növekszik: arabínóz, xilóz, inozit, mannit, fruktóz, ramnóz, szacharóz, raffinóz. VI. Spórák Oválistól hengeres-oválisig terjed, néha szabálytalan nagyság, sima felület. 10-nél több spórából álló spóraláncok. VII. Nonomura-diagramm R(Gy) 100 SRA sm (±)(±)(±)-----Találmányunk céljaira előnyösen alkalmazhatjuk a Streptomyces toxytricini 85—13 3 NRRL törzset, valamint ennek al-tenyészeteit, mutánsait és variánsait. A fenti mikroorganizmusok lipsztatin előállításához vezető tenyésztését különböző fermentációs módszerekkel végezhetjük el. így pl. rázólombikokban vagy 10, 200 vagy 1000 literes fermentorokban dolgozhatunk. Megfelelő szén- és nitrogénforrásokat és a növekedéshez szükséges sókat tartalmazó, folyékony tápközegbe a lipsztatin termelésére képes törzs spóraanyagának vagy micéliumának bizonyos mennyiségét oltjuk és 20—37°C- os hőmérsékleten 1—6 napon át, aerob körülmények között fermentáljuk. Szénforrásként pl. dextrint, glükózt, keményítőt, ribózt és glicerint, míg nitrogénforrásként pl. élesztő-extraktumot, peptont vagy szójalisztet alkalmazhatunk. Sóként előnyösen ammonium-, magnézium- és kalciumsók jöhetnek tekintetbe. A fermentációt 6 és 8 közötti pH értéken végezhetjük el. A lipsztatin izolálását önmagukban ismert és a szakember számára közismert módszerekkel hajthatjuk végre. így pl. a következőképpen járhatunk el: A fermentáció befejezése után a fermentlevet centrifugáljuk; az aktivitás 60—90%-át a sejtmassza, míg a maradékot a centrifugait folyadék tartalmazza. A sejtmasszát kis szénatomszámú alkohollal (pl. metanollal vagy etanollal) kezeljük, és ugyanezzel az oldószerrel extraháljuk. A centrifugált folyadékot megfelelő, szerves oldószerrel (pl. metilén-kloriddal vagy etil-acetáttal) extrahálhatjuk. Az extraktumokból kinyert anyag a kívánt lipsztatint tartalmazza és kromatográfiás úton feldúsítható és tisztítható. Az alábbi módszereket alkalmazhatjuk előnyösen: hexám-metanol-víz 50:40:9 arányú elegyével vég/.ett többszöri extrakció; kovasavgélen végzett szürő-kromatografálás és kloroformos eluálás; kovasavgélen végzett oszlop-kromatográfálás és hexánnal, etil-acetáttal és ezek elegyeivel történő eluálás; nem poláros hordozóanyagokon történő kromatografálás és poláros oldószerekkel (pl. metanollal) végzett eluálás (fordított fázisú kromatografálás) és nagynyomású folyadék-kromatogra'fálás. A Streptomyces toxytricini 85—13 törzs fermentációjának és a lipsztatin izolálásának további részleteit a példákban mutatjuk be. Az (I) képletű tetrahidro-lipsztatint oly módon állíthatjuk elő, hogy a lipsztatint megfelelő katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Katalizátorként pl. palládium/szén katalizátort, platina-oxidot, palládiumot stb. alkalmazhatunk. Oldószerként pl. kis szénatomszámú alkoholokat (pl. metanolt vagy etanolt) használhatunk. A hidrogénezést előnyösen alacsony hidrogénnyomás alatt és szobahőmérsékleten végezhetjük el. Az (I) képletű tetrahidrolipsztatint a gyógyászatban szokásos gyógyászati készítmények alakjában alkalmazhatjuk. A készítmények pl. orálisan adagolhatok (pl. tablet4 3 193579 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
