193569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tri- és tetrapeptidek és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

193569

13

14

folyatás mellett melegítjük, hozzáadunk 4,45 ml etil-jodidot, és a visszafolyatást további 5 órán át folytatjuk, majd a reakciókeveréket lehűtjük és szűrjük. A szűrletet betöményítjük,és az olajos maradékot benzol- 5 lal elkeverve megszilárdítjuk. Az így kapott anyagot szilikagélen kromatografáljuk 5% metanol/diklór-metán eleggyel eluálva.

Kitermelés 2,75 g tisztított anyag.

10

(D) BOC-Gly-EtPhe(4N02).NH2 előállítása

2,03 g BOC-Gly-t (J.A.C.S., 79, (1958)

6180) és 3,13 g HOBT-t 20 ml DMF-ban oldunk, és az oldatot lehűtjük —10°C-ra, hozzáadunk 2,39 DCCl-t, és a reakciókeveréket —10°C-on 30 percig hagyjuk

állni, majd N-EtPhe(4N02).NH2 DMF-os oldatát adagoljuk hozzá. A keveréket 5°C-on egy éjszakán át keverjük, majd még 2,03 g BOC-Gly-t és 2,39 g DCCl-t adagolunk, és a 20 reakciókeveréket szobahőmérsékleten 48 órán át hagyjuk állni. Ezután a diciklohexán-karbamidot szűréssel elválasztjuk, a szűrletet vákuumban betöményítjük, az olajos maradékot etil-acetátban oldjuk, a diciklohexil-kar- 25 bamidot ismét leszűrjük, szűréssel elválasztjuk, a szűrletet kétszer 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer vízzel mossuk, szárítjuk, és az oldószert eltávolítjuk. Kitermelés 4,41 g (96%) amorf szilárd anyag. 30 Tlc-vel (SI, Sill, SV) kevés d ici klohex i l-ka rbamid mutatható ki.

(E) H-Gly-Et-Phe(4N02)-NH2.HCI előállítása

A 4,4 g védett dipeptidet 20 ml anizol- 35 ban oldjuk, majd szobahőmérsékleten 30 percig 60 ml 1 mólos FICI/ecetsav oldattal reagáItatjuk, a kapott oldatot betöményítjük, és a kapott anyagot éterrel elkeverjük.

Kitermelés 3,69 g (100%).

F) B0C-Tyr-D-Arg-Gly-Et-Phe(4N02)-NH2 előállítása

1,77 g BOC-Tyr-D-Arg-HCI-t, 0,98 g HOBT-t és 1,20 g Gly.EtPhe(4N02)-NH2.HCl-t 130 ml DMF-ban oldunk és lehűtjük — 10°C- 45

ra. Ekkor hozzáadunk 0,75 g DCCl-t és 0,37 g NMM-t,és a reakciókeveréket 5°C-on 72 órán át keverjük, majd szűrés és bepárlás után az olajos maradékot 5:1 arányú etil-acetát/n-butanol elegy és NaCl-dal telített 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megosztjuk. A szerves fázist a fenti összetételű oldószerrel mossuk és vákuumban betöményítjük. A maradékot kétszer vízből és kétszer etanolból ismét bepároljuk, és a kapott terméket további tisztítás nélkül alkalmazzuk a következő reakciólépésben.

G) H-Tyr-D-Arg-Gly-Et-Phe(4N02)-NH2-diacetát előállítása 6C

A 2,13 g védett tetrapeptid-amidot 10 ml anizollal és 100 ml 1 mólos HCl/ecetsav oldattal szobahőmérsékleten 40 percig reagáltatjuk, majd az oldószer elpárologtatása és a maradék vízmentes éterben való elke- g5 verése után nyerjük a nyers terméket, amelyet 8

karboxi-metil-cellulózzal töltött ötször 50 ernes oszlopon kromatografálunk, az eluálást 5,1 pH-n lineáris gradiensű ammónium-acetát oldattal végezve. A frakciókat egyesítés után háromszor fagyasztva szárítjuk.

Tlc-re tiszta (SI, SVI, SVII) és Hplc-re analitikaiig tiszta.

Elemanalízis a

C32H47NgOI1.H20 összegképletű vegyületre: számított: C% 49,93; H% 6,63; N% 16,38; mért: C% 50,18; H% 6,35; N% 16,33.

[a]*5 -41,8°]

r(c=l, metanol)

[a]f46 —51,2°J

4. példa

N-amidino-Tyr-D-Arg-Gly-Et-Phe(4 N02)x *NH2-diacetát előállítása

321 g H-Tyr-D-Arg-Gly-Et-Phe(4N02)* xNH2-diacetátot 2 ml etanolban és 0,5 ml DMF-ben oldunk, majd hozzáadunk 108 mg 1 -amidino-3,5-dimetil-pirazol-acetátot és 0,09 ml trietil-amint, és a reakciókeveréket 55°C-on 5 órán át és szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Ezután az oldószert eltávolítjuk, a kapott terméket karboxi-metil-cellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 5,1 pH-n lineáris gradiensű ammónium-acetáttal (0,005 mól-> -*-0,5 mól) végezve.

A kapott anyag Tlc-re (Sí, SVI) és Hplc-re (30%-os acetonitril) tiszta.

Elemanalízis a

C29H41N1107.2CH3C02H.2,5H20 összegképletű vegyületre:

számított: C% 48,29; H% 6,58; N% 18,78; mért: C% 47,92; H% 6,28; N% 18,61.

[a] 25 = -44,2°

(c= 1, metanol)

M¥46 = -53,6°

A következőkben felsorolt peptideket a peptid-kémiában ismert és az előző példákban leírtakhoz hasonlóan állítottuk elő. Mindegyik vegyületet diacetát addíciós sója formájában izoláltuk, hacsak más utalást nem teszünk. Elemanalízis adatai azoknak a vegyületeknek, amelynél az optikai forgatóképesség adatai nem szerepelnek:

6. példa

számított: C% 53,17; H% 6,97; mért: C% 53,03; H% 6,89;

7. példa

számított: C% 51,81; H% 7,06; mért: C% 52,00; H% 6,76;

19. példa

számított: C% 51,88; H% 6,83; mért: C% 51,50; H% 6,69;

20. példa

számított: C% 54,62; H% 7,05; mért: C% 54,80; ' H% 6,99;

28. példa

számított: C% 47,88; H% 6,40; mért: C% 47,68; H% 6,48;

N%

15,50;

N%

15,58;

N%

16,99;

N%

17,06;

N%

15,34;

N%

15,75;

N%

14,39;

N%

14,50;

N%

13,96;

N%

14,08;