193569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tri- és tetrapeptidek és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
193569 SÍ n-butanol/ecetsav/víz 3:1:1 térfogatarányban Síi metil-etil-keton Slll kloroform/metanol/ 32%-os vizes ecetsav 120:90:5 térfogatarányban SIV kloroform/metanol 8:1 térfogatarányban SV kloroform/metanol/0,880 ammónia 120:90:5 térfogatarányban SV1 kloroform/metanol/ 32%-os vizes ecetsav 120:90:40 térfogatarányban SV1I kloroform/metanol/0,880 ammónia 120:90:40 térfogatarányban Hplc. oszlop: Zorbax C-8, 4,6 mm belső 0x25 cm mozgó fázis: acetonitril/0,1 mólos ammónium-acetát, pH 4,0 folyási sebesség: 2 ml/perc detektálás: 254 nm Az ismert intermediert, a védett BOC-Tyr-D-Arg.HCl dipeptidet az (1) vázlatnak megfelelően szintetizáltuk. (A) BOC-Tyr-D-Arg-OMe 1,184 g BOC-Tyr'-t 20 ml THF-ban oldunk és hozzáadunk 5 ml THF-ban oldott 0,426 g NMM-t, majd a keveréket —25°C-ra hűtjük, hozzáadunk 5 ml THF-ban oldott 0,549 g kiór-hangyasav-izobutil-észtert, és a reakciót — 150°C-on 5 percig végezzük. Ezután hozzáadunk 1,0 g D-Arg-OMe.2HCl-at (Helv.Chim. Acta, 41, (1968), 1867) és 0,387 g NMM-et 20 ml DMF-ben és 2 ml vízben oldva, és a kapott keveréket —l5°C-on 2,5 órán át keverjük. Ezután hozzáadunk 4,6 ml 2 mólos kálium-hidrogén-karbonát-oldatot, és a keverést 0°C-on további 30 percig folytatjuk, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot etil-acetát és víz között megosztjuk. A szerves fázist elválasztjuk, vízzel kétszer mossuk, a vizes fázisokat egyesítjük, a pH-t ecetsav adagolásával 7-re beállítjuk, az oldatot sóval telítjük, 5:1 arányú kloroform/butanol eleggyel extraháljuk, majd kétszer kloroformmal mossuk. A szerves fázisokat egyesítjük, kétszer telített sóoldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban betöményítjük. A maradékot vízmentes éterben elkeverjük, a kitermelés 1,28 g (78%). (B) BOC-Tyr-D-Arg.HCI 1,28 g védett dipeptidet 40 ml metanolban és 10 ml vízben oldunk, hozzáadunk 5,7 ml 1 mólos NaOH-ot,és a kapott keveréket szobahőmérsékleten 3,5 órán át keverjük. Ezután az oldatot 5,7 ml 1 mólos sósav adagolásával semlegesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradó vizes oldatot fagyasztással szárítjuk. A nyers terméket tartalmazó oldatot Zorbax C-8 oszlopon sótalanítjuk, metanollal eluáljuk, az elválasztott dipeptidet vízben oldjuk, ekvivalens mennyiségű I mólos 9 6 sósavval kezeljük és fagyasztva szárítjuk, a kitermelés 0,78 g (58%). Elemanalízis a C20H31N5O6.HCI.2H2O összegképletü vegyületre: számított: C% 48,83; H% 6,91; N% 14,24; mért: C% 49,06; H% 6,79; N% 13,73; Tlc.: egy folt SI, SIII, SV-ben I. példa H.Tyr.D-Arg.Gly.N(Et).CH2CH2-C6H4-4- -N02-diacetát előállítása (2 vázlat szerinti vegyület) (A) 2-(4-nitro-fenil)-etil-étil-amin-hidrobroniid l-bróm-2- (4-nitro-fenil)-etánt (Aldrich, 19 g, 50 mmól) egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverünk etil-amin etanolos oldatával (33%, 25 ml, —-180 mmól), majd a kapott narancssárga oldatot bepároljuk, és a kristályos maradékot 10 ml etanolban felvesszük, a kapott anyagot szűrjük,és a szűrletet egy másik, azonos módon készült azonos termékkel egyesítjük. Kitermelés 5 g (36%), o.p.: 211—213°C. Elemanalízis a C10H15N2O2Br összegképletü vegvületre: számított: C% 43,65; H% 5,50; N% 10,18; Br% 29,04-mért: C% 43,88; H% 5,73°N% "l0,19-Br% 28,82. (B) BOC-Gly-N-( Et).CH2CH2-C6H4-4-N02 3,89 g BOC-Gly-t (J.A.C.S., 79, (1957)6180) és 6,0 g HOBT-t 50 ml DMF-ben oldunk, lehűtjük — 10°C-ra és hozzáadunk 4,58 g DCCL-1, a kapott reakciókeveréket — 5°C-on 30 percig keverjük, majd 4,08 g 4-nitro-fenetí 1 -etil-amin-hidrokloridot és 1,5 g NMM-t adagolunk hozzá, és a keverést 5°C hőmérsékleten 72 órán át folytatjuk. A diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet betöményítjűk, a maradékot etil-acetátban felvesszük, háromszor 5%-os Na2C03 oldattal, egyszer vízzel, kétszer 5%-os citromsav oldattal és kétszer vízzel mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban betöményítjük. A kapott olajos maradékot éterben oldjuk, a még jelenlévő diciklohexil-karbamidtól szűréssel elválasztjuk, a szűrletet ismét betöményítjük, a kapott olajos anyag (4,76 g) benzinnel elkeverve nem szilárdul meg. (G) H.GÍy-N( Et)-CH2-CH2-C6H4-4-N02.HCl A 4,76 g védett amidot 35 ml jégecetben o djuk és 45 perc alatt hozzáadunk 35 ml 2 mólos HCl/ecetsav oldatot szobahőmérsékleten. A kapott anyagot vákuumban betöményítjük és éterrel elkeverjük. Kitermelés 366 g (94%), o.p.: 191 —194°C. Elemanalízis a CI2H|8N303CI összegképletü vegyületre számított: C% 50,09; H% 6,26; N% 14,61; mért: C% 49,85; H% 6,38; N% 14,56. 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
