193548. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy hatékonyságú és nagytisztaságú aminoglükozid antibiotikumok előállítására
193548 1. példa A. ) lépés A 168 778 sz. magyar szabadalmi leírás 2. lépése szerint előállított nyers gentamicint a 3. lépés szerint előzetesen elválasztjuk, és az itt kapott 49-69. frakciókat egyesítve szirupsürüségig betöményítjük, majd benzol-etanol elegy segítségével vízmentesítve szárazra pároljuk. Az így kapott 32,4 g antibiotikum elegy 7,6 g gentamicin B-t, 10,5 g gentamicin B,-et, 8,6 g sziszomicint, 1,2 g gentoximicin A-t, 1,0 g gentoximicin B-t, 0,8 g J1-20B antibiotikumot, 1,3 g 3-N”-demetil-gentamicin C2-t, 0,6 g gentamicin A3-at és még 0,8 g további, nem azonosított hatóanyagot tartalmaz. Ezt az antibiotikum elegyet feloldjuk 80 ml ionmentes vízben, és a kapott oldatot 2000 ml Dowex 1X2 (OH) (200-400 mesh szemcsenagyságú anioncserélő gyantát tartalmazó oszlopra [oszlopátmérő (0)=5 cm, gyantaréteg magasság (h) = = 102 cm] visszük, majd ionmentes vízzel 80 ml/óra sebességgel eluáljuk. 100 ml-es frakciókat véve a 12— I9.frakciókat egyesítjük és a fentiek szerint szárazra pároljuk. 12,1 g viszonylag apoláris antibiotikum elegyet kapunk, mely 8,4 g sziszomicint, 1,1 g gentoximicin A-t 0,9 g gentoximicin B-t és 1,2 g 3“-N-demetil-gentamicin C2-t tartalmaz. A 22—36. frakciókat szárazra párolva 18,5 g poláris anti biotikum elegyet kapunk, mely 7,2 g gentamicin B-t, 10,1 g gentamicin B,-et, 0,7 gJI-20B antibiotikumot és 0,3 g gentamicin A3-at tartalmaz. B, .) lépés Az A.) lépés szerint nyert 12,1 g viszonylag apoláris antibiotikum elegyet feloldjuk 60 ml vízben, és 800 ml BioRex-70(NH4)'t' (400 mesh szemcsenagyságú) gyantát tartalmazó oszlopon (fl—3 cm, h=114 cm) kromatografáljuk 30 ml/óra sebességgel. A leoldást 1500—1500 ml 0,12, 0,16 és 0,20 n ammóniumhidroxid oldattal végezzük. 100— 100 ml-es eluátum frakciókat szedve a 18—21. frakciókból szárazra párlással 0,65 g gentoximicin B-t, a 24—28. frakciókból 0,85 g tiszta gentoximicin A-t kapunk. Biológiai hatékonyságuk gentamicin C standardre vonatkoztatva 350, illetve 410 E/mg. A 33—38. frakciókból 7,2 g nagytisztaságú sziszomicint kapunk. Biológiai hatékonysága 1750 E/mg, [a]*5= + 190° ( 1 %, víz). A 40—42. frakciókból 0,5 g 3-N-demetil-gentamicin C2-t kapunk. B2.) lépés Az A.) lépés szerint nyert poláris antibiotikum elegyet feloldjuk 100 ml desztillált vízben, és a kapott oldatot 2500 ml CM—Sephadex C—25 (NH4)+ ioncserélőt tartalmazó oszlopon (0=6 cm, h=88 cm) kromatografáljuk. Az eluálást 25 liter 0,15 n ammóniumhidroxiddal végezzük, 150 ml/óra sebességgel. 250 ml-es eluátum frakciókat szedve, a 28—42. frakciókból 6,6 g nagytisztaságú 7 gentamicin B-t (625 E/mg, [<x]|,5= + 1660 (1% víz)), a 46—63. frakciókból pedig 9,1 g nagytisztaságú gentamicin B,-et (530 E/mg, [a]£5=172° ( 1 %, víz) ) kapunk! A 69—71. frakciókból 0,3 g gentamicin A3 izolálható. 2. példa Az 1. példa B, lépése szerint kapott 0,5 g nagytisztaságú sziszomicin bázist feloldunk 35 ml ionmentes vízben, majd az oldathoz hűtés és keverés közben 5n kénsavat adunk, hogy az oldat pH-ja 3,5 legyen, majd az elegy pH-ját dietilaminnal 6,0-ra állítjuk be. Az elegyhez 1,0 g aktív szenet (Norit A) adunk, 30 percig keverjük, majd forró ionmentes vízzel átmosott Seitz-lapon megszűrjük. A szűrőt 2x8 ml ionmentes vízzel átmossuk és a mosófolyadékkal egyesített szűrletet keverés közben 500 ml pa. metanolba öntjük. A kivált sziszomicin szulfátot 1 órás állás után leszűrjük, a csapadékot 3x500 ml metanollal mossuk, majd vákuumban, 60°C-on súlyállandóságig szárítjuk. Ily módon 6,9 g sziszomicin szulfátot kapunk. Optikai forgatóképessége: [a]p5=+1.07° ( 1 %, víz). Szulfát tartalma: 33,2%. Hamutartalma: 0,1%. 3. példa A 2. példa szerint eljárva, sziszomicin helyett az 1. példa B2 lépése szerint nyert 5 g gentamicin B-ből kiindulva, 6,1 g gentamicin B szulfátot állítottunk elő. Optikai forgatóképessége: [a]p5= + 118° ( 1% víz). Szulfát tartalma: 27,6%, hamutartalma: 0,1 %. 4. példa A 2. példa szerint eljárva, sziszomicin helyett az 1. példa Bj lépése szerint nyert 0,8 g gentoximicin A-ból kiindulva, 1,06 g gentoximicin A szulfátot állítottunk elő. Optikai forgatóképessége: [a]£5=-|-990 (0,5%, víz). 5. példa A 2. példa szerint eljárva, sziszomicin helyett az 1. példa B, lépése szerint nyert 0,6 g gentoximicin B-ből kiindulva, 0,81 g gentoximicin B szulfátot állítunk elő. Optikai forgatóképessége: [a]p=+96° (0,5% víz). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az új gentoximicin A és gentoximicin B, valamint az ismert gentamicin B, B, és sziszomicin antibiotikumok nagy tisztaságban való előállítására ezen antibiotikumokat tartalmazó nyers antibiotikum elegyekből ioncserélő kromatográfia felhasználásával, kívánt esetben savaddíciós sóik formájában, azzal jellemezve, hogy a fenti antibiotikumok elegyét először hidroxit formájú, finom szemcsés, erősen bázikus anioncserélő gyantán kromatografáljuk eluáló-8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
