193507. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferonszerű polipeptidek előállítására
193507 land, USA) gyűjteményében 1981. február 26-án az alábbi kultúrákat, amelyeket HFIF-H, illetőleg HFIF-I kultúrákként azonosítottunk: H: E. coli M5219 (pPLa-HFIF-67-12AMl) I: E. coli HB101 (p [235]-gHFIF-4) Ezek a kultúrák az intézet gyűjteményében az ATCC 31824, illetőleg ATCC 31825 nyilvántartási számokat kapták. Bár a fenti leírásban a találmány számos különféle kiviteli alakját ismertettük részletesen, a szakértő számára nyilvánvaló, hogy az eljárás különféle módokon változtatható a találmány keretében és így a találmány szerinti eljárás különböző változatai alkalmazhatók. Ezért a találmány köre nem korlátozódik a fenti leírás példaszerű ismertető részeire, hanem azt az alább következő igénv pontok határozzák meg. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás IFN-ß-tipusü polipeptidet kódoló DNS szekvencia előállítására, azzal jellemezve, hogy humán fibroblaszt sejtekből citoplazmás RNS-t izolálunk, ebből a poli (A) RNS-t elválasztjuk, ebben az IFN-ß-mRNS-t — előnyösen gradiens centrifugálással vagy elektroforézissel — dúsítjuk, ebből RNS-függő DNS-polimeráz segítségével dTTP, dATP, dCTP és dGTP jelenlétében egyszálú cDNS keveréket alakítunk ki, tisztítás után dTTP, dATP, dCTP és dGTP jelenlétében DNS polimeráz segítségével kettősszálúvá alakítjuk, az így kapott terméket SÍ nukleázzal kezeljük, a heterogén cDNS keveréket elektroforézissel tisztítjuk, a kapott IFN-ß-cDNS-t tartalmazó kettősszálú cDNS keveréket valamely hordozóba juttatjuk, az így kapott hibrid vektorral E. coli törzset transzformálunk, antibiotikum-érzékenység alapján transzformánsokat izolálunk, a kapott plazmid „könyvtáriból RNS-hibridizálási módszerrel IFN-ß-t kódoló géndarabokat is tartalmazó plazmidokat izolálunk, és ezekből a plazmidokból az IFN-ß-t kódoló géndarabokat kihasítjuk. (Elsőbbsége: 1980.04.03.) 2. Eljárás IFN-ß-tipusü polipeptidet kódoló DNS szakaszt tartalmazó rekombináns DNS-molekula előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely E. coli eredetű klónozó hordozóba valamely 1. igénypont szerinti DNS-szekvenciát, előnyösen (a) G-pBR322(Pst) /HFIF, illetve G-pBR322(Pst) /HFIF3, illetve G-pBR322(Pst) HFIF6, illetve G-pBR322(Pst)/HFIF7 rekombináns DNS-ek DNS beiktatásait, amelyeket előnyösen a DSM 1971 —1973 letéti számon deponált törzsek hordoznak, (b) az (a) pontban leírt DNS beiktatásokhoz hibridizálni képes DNS-molekulákat, vagy (c) az (a) és (b) pontban leírt DNS beiktatásoktól, illetve DNS-molekuláktól a genetikai kód természetes degenerációja miatt eltérő DNS szekvenciákat, valamint valamely kifejeződést szabályozó 73 38 szekvenciát vezetünk be. (Elsőbbsége: 1980.04.03.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (b) pontban említett DNS szekvenciaként (d) G-pPLa-HFIF-67-12, illetve G-pPLa-HFIF-67- 12A19, illetve G-pPLc-HFIF-67-8 rekombanáns DNS-ek DNS-beiktatásait, amelyeket előnyösen a DSM 1851 —1854 letéti számon deponált törzsek hordoznak, (e) a (d) pontban leírt DNS beiktatásokhoz hibridizálni képes DNS molekulákat, vagy (f) a (d) és (e) pontban leírt DNS beiktatásoktól, illetve DNS-molekuláktól a genetikai kód természetes degenerációja miatt eltérő DNS szekvenciákat vezettünk be. (Elsőbbsége: 1980.06.06.) 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (b) vagy (e) pontban leírt DNS szekvenciaként. (g) G-pPLa-HFIF-67-12AMl, illetve G-pPLa-HFIF-67-12Al9 BX-2 rekombináns DNS-ek DNS-beiktatásait, amelyeket előnyösen az ATTC 31824, illetve DSM 1853 letéti számon deponált törzsek hordoznak, (h) a (g) pontban leírt DNS beiktatásokhoz hibridizálni képes vagy DNS-molekulákat, vagy (i) a (g) és (h) pontban leírt DNS beiktatásoktól, illetve DNS molekuláktól a genetikai kód természetes degenerációja miatt eltérő DNS szekvenciákat vezetünk be. (Elsőbbsége: 1980.06.06.) 5) A 2—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (b), (e) vagy (h) pontban leírt, hibridizálni képes DNS molekulaként (j) p [325]-gHFIF-4 rekombináns DNS DNS-beiktatását, amelyet előnyösen az ATCC 31825 letéti számon deponált törzs hordoz, (k) a (j) pontban leírt DNS-beiktatáshoz hibridizálni képes DNS-molekulákat, vagy (l) a (j) és (k) pontban leírt DNS-beiktatásoktól, illetve DNS molekuláktól a genetikai kód természetes degenerációja miatt eltérő DNS szekvenciákat iktattunk be. (Elsőbbsége: 1980.06.06.) 6. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy DNS szekvenciaként a ATGACCAACAAGTGTCTCCTCCAAATTGCTCTCCTGTTGTGCTTCTCCACTACAGCTCTTTCCATGAGCTACAACTTGCTTGGATTCGAAGCTCCTGTGGCAATTGAATGGGAGGCTTGAATACTGCCTCAAGCACAGGATGAACTTTGACATCCCTGAGGAGATTAAGCAGCTGCAGCAGTTCCAGAAGGAGGACGCCGCATTGACCATCTATGAGATGCTCCAGAACATCTTTGCTATTTTCAGACAAGATTCATCTAGCACTGGCTGGAATGAGATCATTGTTGATAAACCATCTGAAGACAGTCCTGGAAGAAAAACTGGAGAAAGAAGATTTCACCAGGGGAAAACTCATGAGCAGTCTGCACCÎGAAAAGATATTATGGGAGGATTCTGCATTACCTGAAGGCCAAGGAGTACAGTCACTGTGCCTGGACCATAGTCAGAGTGGAAATCCTAAGGAACTTTTACTTCATTAACAGACT-74 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
