193505. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes 2-amino-4-hidroxi-kinazolin-származékok előállítására
21 193505 Elemi analízis: C23H22N606 képletre számított: C: 57.74; H: 4.63; N: 17.56; talált: C: 57.89; H: 4.63; N: 17.59. A következő példák a találmány szerinti gyógyászati készítmények előállítását szemléltetik: tablettánként súly/súly aktív vegyület (mikronizált) (CB 3717) 83,3% „Avicei“ (mikrokristályos cellulóz) 12,7% polivinil-pirrolidon 1 % alginsav 2 % magnézium-sztearát 1 % A találmány szerinti vegyületet az „Avicel“-lel keverjük és a polivinil-pirrolidont hozzáadjuk, elegendő mennyiségű ipari, 74°C- os szeszben oldjuk, hogy granulálásra alkalmas masszát kapjunk, amelyet 20 mesh száltávolságú szitán (angol mesh standard) granulálunk, és a keletkezett granulátumot 50°C-ot nem meghaladó hőmérsékleten szárítjuk. A száraz granulátumot 20 mesh száltávolságú szitán átengedjük, és az alginsavat és magnézium-sztearátot ezután adjuk hozzá, és keverjük a granulátummal. A terméket tablettákká sajtolhatjuk. Ugyanezzel a módszerrel a következő készítmények állíthatók elő: tablettánként súly/súly Aktív vegyület (CB 3717) 62,5% „Avicei“ (mikrokristályos cellulóz) 33,5% polivinil-pirrolidon 1 % alginsav 2 % magnézium-sztearát 1 % További tabletták készíthetők a következő összetétel szerint: tablettánként súly/súly Aktív vegyület (mikronizált) (CB 3717) 83,3% laktóz (300 mesh) 6,3% kukorica keményítő 5 % zselatin 3,3% magnézium-sztearát 2 % Ezeket a tablettákat úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet a laktózzál és a kukoricakeményítő mennyiségének a felével összekeverjük, és a zselatin 5 vegyes %-os vizes oldatát adjuk hozzá. A terméket 16 mesh száltávolságú szintán 5 granulálhatjuk, és a keletkező granulátumot 60°C hőmérsékletet nem meghaladó hőmérsékleten súlyállandóságig szárítjuk. A száraz granulátumot 20 mesh száltávolságú szintán átengedjük, és magnézium-sztearáttal, vala- 10 mint a maradék kukoricakeményítővel keverjük. A terméket tablettává préseljük. Injektálható oldatot a következőképpen állíthatunk elő. Ha a találmány szerinti (CB 3717) vegyü- 15 let sav formában van, akkor 2 mmólt 10 ml 0,9%-os vizes nátrium-klorid oldatban oldhatjuk, amely elegendő nátrium-hidroxidot vagy más bázist tartalmaz a semlegesítéshez. 20 A 3. példa szerinti vegyületeket in vitro mint TS és sejtnövekedés inhibitorokat, és in vivo pedig L1210 tumorral szemben vizsgáltuk. Mivel a metotrexát (MTX) rezisztencia a rák-terápiában fontos probléma, a 25 találmány szerinti vegyületek vizsgálata is ennek szem előtt tartásával történt. Az MTX rezisztens L1210/R71 sejtvonal kereszt-rez'sztenciáját, — melyről tudott, hogy megnövekedett DHFR és normális MTX transz- 30 portú — tenyészetben mértük, és a találmány szerinti vegyületekkel kapcsolatban azt is megbecsültük, hogy a jelzett MTX-szel és folsavval mennyire képesek versenyezni az L1210 sejtekbe történő transzport során. 35 Enzimológia A CB 3716 és CB 3717 vegyületeket külön-külön 0,1 n nátrium-hidroxid oldatban oldjuk, és használat előtt semlegsítjük. 10,0 g 40 állatokból izolált L1210 sejtfázis citoszólt TS I50 és Ki meghatározásokra részlegesen t sztítunk, hogy eltávolítsunk egy foszfatázt, amely a dUMP-t deoxiuridinné bontja. (Az 150 az a gátlókoncentráció, amely a TS reakcióse- 45 bességét 50%-kal csökkenti). A DHFR-t adszorbciós kromatográfiás módszerrel tisztítjuk, és Ki meghatározásokat végzünk. Az eredmények a következő 1. táblázatban láthatók, és az összehasonlításra hasz- 50 nált vegyület a CB 3716 és 3717 vegyületek nek megfelelő 10-propil-származék. 22 Vegyület R Tirridált szintetáz *50 /nM/ Dihidrofolát reduktáz Ki /nM/ összehasonlító vegyület ~CH2_CH2~CH3 170 20 CB3716-ch2-ch=ch2 69 27 CB3717-CH2-C5CH 5 14 12
