193483. lajstromszámú szabadalom • Eljársáar magasabb rendű szervezetek sejtjeinek a tenyésztésére és berendezés az eljárás megvalósítására
zsákkal együttes folyamatos vagy szakaszos helyzetváltoztatása, amely a tenyésztőközeg keverését hullámmozgással biztosítja, önmagában ismert módon és/vagy olyan módon érhető el, amely szintén a találmány körébe tartozik. A bütykös tengely, excenter, emeltyű vagy tolattyú alkalmas mozgató eszközzel, például elektromotorral hajtható; az elektromotort folytonosan vagy szakaszosan működtethetjük, az előre meghatározott programnak megfelelően. Azt a helyet, amelyen a hordozó elmozdul (horog, tengely, csapágy), ugyanígy, az 7 hordozó kerülete és középpontja között bárhol beállíthatjuk, ahogyan az adott esetben legcélszerűbb. Kívánt esetben az 7 hordozó helyzete változtatható akár az egyik oldalán, akár valamennyi oldala felől, egymás után. A löketek ma gassága, sebessége és frekvenciája lényegében a tenyésztett szervezettől, a tenyésztőközeg viszkozitásától és természetesen a tenyósz tés időrendjétől függ, ezért minden esetben kü lön külön kell meghatározni. Ha egyfajta organizmust hosszabb időn át tenyésztünk, akkor elsősorban az üzemeltetés gazdaságossága szempontjából célszerű több 7 hordozót a 7 tenyésztőzsákokkal példá ul egymás fölé vagy egymás mellé helyezni és egy mozgatóeszközzel működtetni. A találmány szerinti eljárás alkalmazásával igen egyszerűen érjük el a tenyésztőközeg hullámmozgását olyan mértékben, amely az adott organizmus számára a legkedvezőbb. A folyadék hullámmozgása a szaporodó sejtek szuszpenziójának kielégítő keverése mellett biztosítja a tenyésztőközeg viszonylag nagy felületét (térfogatához viszonyítva), amely érintkezésben áll a folyamatosan odajuttatott légróteggel, és egyszersmind biztosítja az oxigén kielégítő elszállítását a szaporodó sejtekhez. A hullámmozgás áltál elért keverés hatékonyságát tovább növelhetjük úgy, hogy az 7 hordozót rácsalakúra képezzük ki, és a 7 rugalmas és hajlékony tenyésztőzsák alsó oldalát számos barázdával alakítjuk ki, amelyek a hullámmozgás irányára merőlegesek a súly hatása alatt. Ezáltal nemcsak a sejtszuszpenzió keveredését, hanem a tenyésztőközeg oxigénnel való ellátását is elősegítjük, egy duzzasztó gát rendszerhez hasonló módon A találmány szerinti berendezés elsősorban szabadon szuszpendált sejtek tenyésztésére szolgál, amelyek növekvése és szaporodása szilárd szubsztrátumhoz (például fibroblasztok hoz) való kötődést feltételez. Az ilyen sejtek a 7 tenyésztőzsák belső falán szaporodnak, s így a sejtek megkötődésóre és szaporodására alkalmas, hatékony terület lényegesen megnövekszik azoknak a mikrohordozóknak a jelenléte által, amelyek a tenyésztőközegben szuszpendálva vannak A találmány szerinti berendezésben az elmozdulások mérete és frekvenciája, a tenyész tőközeg felületének magassága, a légáram, a hőmérséklet és a tenyésztés időtartama empi3 rikusan optimalizálható az adott sejttípus és a tenyésztőközeg adott összetétele szerint. A találmány szerinti eljárás és berendezés előnyösen alkalmazható rostos mikroorganizmusok tenyésztésére is folyékony tenyésztőközeg felületén. Állandó tenyésztés során az oldatból felfelé a növekvő mikroorganizmusok irányába való lassú tápanyag-diffúzió gyakran válik a növekvés és szaporodás korlátozó tényezőjévé. Az 7 hordozók helyzetváltoztatásával előidézett szakaszos hullámmozgás következtében a közegben oldott tenyésztési szubsztrátumok konvekciója megy végbe, és ez lehetővé teszi a gyorsabb felszívódást, aminek következtében növekvésük meggyorsul, és szaporodásuk intenzívebbé válik. A találmány szerinti eljárást és berendezést részletesen bemutatjuk az alábbi, nemkorlátozó jellegű példákban. 7. példa A 7 tenyósztőzsákokat, amelyek mérete 32,5x44 cm, polietilén-szeletekből készítjük merőleges irányú hegesztéssel. A 7 zsákokat 2500 ml folyékony tenyósztőközeggel töltjük meg, amely 25 t% szacharózt és 1 t% ammóm um-citrátot tartalmaz szén-, illetve nitrogénforrásként. A felületméretet 1000 cm2-re állítjuk 25 mm felületi magasságban. A közeget sterilezés után 24 “C-ra hűtjük, és Claviceps purpurea CCM F 725 szaporítótörzs konidiumá ból készült, szubmerz vegetatív inokulummal beoltjuk. A 7 tenyésztőzsákokat 24 JC hőmérsékleten 21 napig inkubáljuk, és az ötödik naptól kezdve a közeg feLületén át levegőztetjük 410 ml/perc/1000 cm2 steril levegővel. így összesen hat tenyésztőzsákot állítunk elő, ame lyek közül hármat a teljes hátralévő időben inkubálunk, míg a másik hármat szakaszosan rázzuk 8 mm magassággal és óránként egy lengéssel, a tizedik naptól kezdve A lengési 4 tengelyt a 7 tenyésztözsák felezőpontjában helyezzük el. Az inkubálás befejezése után a micéliumot eltávolítjuk, vízzel átöblítjük, szárítjuk.'súlyát és alkaloidtartalmát meghatározzuk. Ha az inkubálást úgy végezzük, hogy a tenyésztőközeget szakaszos hullámmozgással keverjük, akkor 14 % al nagyobb szárazsúlyú micéliumot ka punk, és a micélium alkaloidtartalma átlagosan 35 t% kai több, mint azon kontrollok alkaloid tartalma, amelyet az inkubálás időtartama alatt nem mozgatunk. 2. példa A tenyésztést az 1. példában használt be rendezésben végezzük. Vinca rosea sejtszusz penzióját használjuk a tenyésztésre. A töltést az 1. példában leírt módon végezzük, a tenyész tés időtartama 14 nap 24 “C hőmérsékleten a közeg 3 t% szacharózt és 2 x 10 6 mól 2,4 di klór-fenoxi-ecetsavat tartalmaz [T. Murashige és F. Skoog: Physiol. Plant. 15, 473 (1962)J A te nyésztést állandó rázás közben végezzük, a rá zás magassága 4 mm, frekvenciája 1 rázás/10 másodperc. A levegőztetést a tenyésztés teljes időtartama alatt végezzük 30 ml/perc/1000 cm2 levegőtérfogattal. A 2500 ml tenyésztőközeggel 4 3 193483 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
