193472. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emberi leukocita interferon tisztítására
193472 4 8 mól/l-es karbamid oldat 240 ml-ét (3% kolonnatérfogat). Ezután a kolonnára visszük az interferon oldatot és 2,5 pH-jú, 0,1 mól/l-es foszfát-pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakciók térfogata 700 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 500.000 lE/mg fehér* je, térfogatalctivitása 100.000 lE/ml és összaktivitása 7 * 107 IE. 2. példa 8585 ml natív interferonhoz (3000 lE/ml, 2 mg/ml fehérje) hozzáadunk 4292 g ammónium-szulfátot. A kicsapódó fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot 6.0 pH-jú, 0,1 mól/l-es foszfát-pufferban feloldjuk, az oldat 6 mól/l karbamidot tartalmaz. Az ultragéllel töltött kolonnát (K 100/100) egyensúlyba hozzuk 6,0 pH-jú 0,1 mól/l -es foszfát puferral és a kolonnára visszük ugyanebben a pufferban készített 6 mól/l-es karbamid 400 ml-ét (5% kolonnatérfogat). Ezután a kolonnára juttatjuk az interferon oldatot és 6,0 pH-jú 0,1 mól/les foszfát puferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 1360 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 300.000 lE/mg fehérje, térfogataktivitása 75.000 lE/ml és összaktivitása 9,7 * 10 IE. 3. példa 8270 ml natív interferonhoz (2480 lE/ml, 1 mg/ml fehérje) hozzáadunk 4135 g ammónium-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot feloldjuk 9,0 pH-jú, 0,1 mól/l-es foszfát pufferban, az oldat 4 mól/l karbamidot tartalmaz. Az ultragéllel töltött kolonnát (K 100/100) egyensúlyba hozzuk egy 9,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát puferral, és a kolonnára juttatjuk ugyanebben a pufferban készített 4 mól/l- es karbamid oldat 320 ml-ét (4% kolonna térfogat). Ezután az interferon oldatot kolonnára visszük és 9.0 pH-jú 0,1 mólos foszfát pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 900 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 50.000 lE/mg fehérje, térfogatal^tivitása 20.000 lE/ml, és összaktivitása 1,8 * 10' IE. 4. példa 8980 ml aktív interferonhoz (4960 IR/ml, 3 mg/ml fehérje) hozzáadunk 4490 mg ammónlum-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérjecsapadékot 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferban feloldjuk, az oldat pufferban 2 mól/l karbamid van. Az ultragéllel töltött kolonnát (K 100/100) egyensúlyba hozzuk egy 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferral és a kolonnára felvisszük ugyanebben a pufferban készített 10 mól/l-es karbamidoldat 300 ml-ét (3,75% kolonna térfogat). Ezután a kolonnára juttatjuk az interferon oldatot és 7,0 pH-jú 0,1 mólos foszfát pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 1280 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 400.000 lE/mg fehérje, térfogataktjvitása 70.000 lE/ml és összaktivitása 9,4 * 10 IE. 5. példa 750 ml interferonhoz (3500 lE/ml, 3,3 mg/ml 3 fehérje) hozzáadunk 308 g ammónium-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot feloldjuk 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferban, az oldat 1 mól/l guanidin-kloridot tartalmaz. A géllel töltött kolonnát (K 50/100) egyensúlyba hozzuk egy 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát puf ferrel és a kolonnára felvisszük ugyanebben a pufferban készített 1 mól/l guanidin-klorid oldat 80 ml-ét (4% kolonna térfogat). Ezután a kolonnára juttatjuk az interferon oldatot és 7,0 pH-jú mól/l-es foszfát pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 200 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 30.000 lE/mg fehérje, térfogataktivitása 15.000 lE/ml és összaktivitása 6*10° IE. 6. példa 760 ml natív interferonhoz (3500 IR/ml, 3,3 mg/ml fehérje) hozzáadunk 310 g ammónium-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot feloldjuk, 7,0 pH-jú 0,1 mól/l foszfát pufferban, az oldat 6 mól/l guanidin-kloridot tartalmaz. Ultragéllel töltött kolonnát (K 50/100) egyensúlyba hozunk egy 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferral és a kolonnára visszük ugyanebben az oldatban készített 6 mól/l-es guanidin-klorid 60 ml oldatát (3% kolonna térfogat). Ezután a kolonnára juttattuk az interferon oldatot és 7,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 220 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 35.000 lE/mg fehérje, térfogataktivitása 15.000 lE/ml és ossz aktivitása 6,2 * 106 IE. 7. példa 935 ml natív interferonhoz (2000 lE/ml, 2,0 mg/ml fehérje) hozzáadunk 466 g ammónium-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot feloldjuk 3,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferban, az oldat 3 mól/l guanidin-kloridot tartalmaz. Ultragéllel töltött kolonnát (K 50/100) egyensúlyba hozunk 3,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferral és a kolonnára felviszünk ugyanebben a pufferban készített 3 mól/l-es guanidin-klorid oldat 60 ml-ét (3% kolonna térfogat). Ezután a kolonnára juttatjuk az interferon oldatot és 0,1 mól/l-es 3,0 pH értékű foszfát pufferral eluáljuk. Az összegyűjtött aktív frakció térfogata 240 ml. A tisztított készítmény specifikus aktivitása 96.000 IE/ mg fehérje, térfogataktivitása 32.000 lE/ml és ossz aktivitása 7,7 * 106 IE. 8. példa 1230 ml natív interferonhoz (7000 lE/ml, 3,5 mg/ml fehérje) hozzáadunk 613 mg ammónium-szulfátot. A kicsapódott fehérjét centrifugálással elválasztjuk. Az elválasztott fehérje csapadékot feloldjuk 8,0 pH-jú 0,1 mól/l-es foszfát pufferban, az oldat 4 mól/l guanidin-kloridot tartalmaz. Az ultragéllel töltött kolonnát (K 50/100) egyensúlyba hozzuk 8,0 pH értékű 0,1 mól/l-es foszfát pufferral és a kolonnára visszük ugyanebben a pufferban készített 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
