193398. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nyers vinblasztin szulfát kromatográfiás tisztítására
193398 kát külön-külön az alábbi módon dolgoztuk fel: Egy oldószeres eluátumot vízzel négyszeres térfogatra hígítjuk, majd az etilacetátot leválasztjuk és az étilacetát térfogatára számított kétszer 1 /3 rész vízzel visszarázzuk. Az egyesített vizes oldatot háromszor 1/3 rész metilénkloriddal (alkaloid-mentességig) extraháljuk. Az egyesített metilénkloridos oldatot 3-5-ször azonos mennyiségű vízzel extrahálva piridin-mentesítjük. Az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és az oldatot vákuumban max. 40°C- on bepároljuk, majd 10-szeres etanolban oldjuk és az egyes frakciók pH-ját 10% -os kénsavas etanollal pH=4,2-4,5 értékre állítjuk. 10-16 óra 10°C-on történő kristályosítás után a kristályokat kiszűrjük, 10°C-os etanollal mossuk, majd petroléterrel etanolmentesre mossuk. A kristályokat szobahőmérsékleten szárítjuk. A fenti módon eljárva a három frakcióból három terméket kapunk: A/ Tiszta VLB-frakció kénsavas sója: 3,9-4,1 g B/ VLB-|-VCR (vegyes) frakció kénsavas sója: 0,6 g C/ VCR-frakció kénsavas sója: 0,3 g A/ A tiszta VLB frakció, kénsavas sóját ismert módon átkristályosítva 90-92%-os hozammal gyógyszerkönyvi tisztaságú Vinblasztin-szulfátot kapunk. A végtermék az Északamerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyvének XXI. kiadásában részletezett, a továbbiakban az USP XXI-ben leírt módszerrel a következő tartalmú és tisztasági értékeket mutatja: Hatóanyagtartalom: 98,9% (szárazanyagra számolva) Idegen alkaloid: 1,3% Fajlagos forgatása: [a|£°=—31° (2%-os metanolban) B/ A vegyes frakciót, mely kb. 7:3 arányban tartalmaz VLB-t és VCR-t, ismert módon vinkrisztinné dolgozzuk fel. A kapott VCRXH2S04 USP XXI minőségnek megfelel. C/ A VCR frakció kénsavas sóját ismert módon átkristályosítva szintén gyógyszerkönyvnek megfelelő minőségű végterméket kapunk. 2. példa 4000 g nyers VLB-szulfátból (35% VLB- iartalom) — melyet a 160 967 számú magyar szabadalmi leírás szerint állítottunk elő — kiindulva a bázisfelszabadítást, leurozinmentesítést, formilezést az 1. példában leírtak szerint végezzük. A műveletsor végén 3200 g kromatografálandó szárazmaradékot kapunk. Oszlopkromatográfiás körülmények: Oszlopméret: 20 cm x 2 m (62,8 1) Töltet: szilikagél: 0,04-0,063 mm 30 kg (60 I) 5 4 Eluláló rendszer: (piridin-ecetsav-víz=20:14,3:1 1 ) :80-etilacetát:20 Oszlopsebesség: 5 l/ó Kivitelezés: 2db 60 1-es oszlopot feltöltünk etilacetátban szuszpendált 30-30 kg szilikagéllel. Az oszlopokat 10-10 1 eluenssel előfuttatjuk. Agyag oldása: 3200 g VLB-bázisból 3200 ml piridin-ecetsav-víz 20:14,3:11 elegyével sűrű olajos oldatot készítünk, majd kevertetés közben 12,8 1 etilacetátot adunk hozzá. Az oldatot állni hagyjuk. Az esetleg leváló vizes részt leválasztjuk, majd az oldatot megfelezve 1-1 69 1-es oszlopra visszük. Frakciószedés: I. frakció: VCR II. frakció: VCR + VLB III. frakció: VLB A feldolgozás az 1. példában leírtak szerint történik. A kapott 3 főfrakció további feldolgozását gyógyszerkönyvi minőségű végtermékké az alábbiak szerint végezzük: Ismert módon, például a 154 715 sz. magyar szabadalmi leírás szerint, járhatunk el, melynek értelmében alumínium-oxid-oszlopon VCR és VLB elválasztást végzünk. A megfelelő frakciók átkristályosítása után gyógyszerkönyvi minőségű VCR-szulfátot kapunk. A VLB-tartalmú frakciót a továbbiakban nyers VLB-szulfátként kezeljük és újra feldolgozáshoz használjuk. A tiszta (900 g) VLB-frakció kénsavas sóját ismert módon átkristályosítva 800 g USR XXI-minőségű vinblasztin-szulfátot kapunk. A 900 g vegyes frakciót, mely a VLB mellett 7-8 % VCR-t is tartalmaz, ismert módon VCR-ré oxidáljuk. A termék izolálás és tisztítás, valamint sóképzés után USP. XXI-nek megfelel. 6 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás legalább 30% vinblasztint tartalmazó nyers vinblasztin-szulfát szilikagél-oszlopon történő kromatográfiás tisztítására, azzal jellemezve, hogy a kromatográfiás elúcíót 70-90 térfogatrésznyi etilacetát vagy aceton és 10-30 térfogatrésznyi pH = 4-5,5 értékű 1:0,4-2,5:0,2-0,55 térfogatarányú piridin-ecetsav-víz rendszerek elegyével végezzük, majd a kapott aikaloid-só(ka)t tartalmazó frakciókat 1:1-10:1, előnyösen 3:1 térfogatarányban vízzel hígítjuk, a kapott szerves fázist elválasztjuk, a tiszta vinblasztin-szulfátot ismert módon izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pH = 4-5,5 értékű piridin-ecetsav-víz rendszerként 1:0,715:0,55 térfogatarányú rendszert használunk 5 10 15 20 25 30 35 40 45 30 35 <30 35
