193294. lajstromszámú szabadalom • Kérődzők emésztését előnyösen befolyásoló készítmény
193294 Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants, 2. kötet, 622-625. oldal (1971) ). A kívánatos ecetsav propionsav arány hizlalás esetén 1,5-2:1, tejtermeléskor 3:1, létfenntartás, illetve vemhesség esetén 4:1 (Kaufmann, W., Rohr, K: Der Einfluss des Futters auf die bakteriellen Fermentation in Vormagen, Handbuch der Tierernährung, 263. oldal, 1969. Parey, Hamburg; Berlin). A találmány egy előnyös kiviteli módja szerint ezen meghatározásokat úgy végezzük, hogy bendőből vett mintából baktériumokai izolálunk, majd vizsgáljuk az egyes izolátumok illózsírsav bioszintetizáló képességét. Az adott takarmánnyal kiegészített, bendőfolyadékot tartalmazó komplett táptalajon, anaerob körülmények között tenyésztjük a mikroorganizmust, majd gázkromatográfiás analízissel meghatározzuk a tenyészet ecetsav, propionsav és vajsav koncentrációját. A fenti szerves savakat előnyös arányban termelő mikroorganizmus sejteket genetikailag megjelöljük, majd vizsgáljuk szaporodásukat a kérődző állatok bendőjében. Azokat a törzseket, amelyek legalább 60 napon át képesek osztódni az adott takarmánynyal etetett állat bendőjében és kedvezően befolyásolják a takarmány szénhidrát tartalmának ecetsavvá, propionsavvá és vajsavvá való lebontását, kiválasztjuk, tenyésztjük, elkülönítjük, fenntartjuk, tároljuk és tenyészeteiket kívánt esetben, állattenyésztési szempontból elfogadható alakká formulázva a bendőflóra előnyös kialakítására vagy befolyásolására kérődző állatoknak orálisan adagoljuk. Három, sorrendben szénával, abrakkal, illetve melasszal etetett állat bendőjében szaporodni és hosszú ideig fennmaradni képes, az emésztést előnyösen befolyásoló Hh-GYOKI-1-123SZ, Hh-GYOKI-2- 14Ab, illetve Hh-GYOKI-3-81 Me jellel jelölt törzset MNG 00287, MNG 00288, illetve MNG 00289 sorszámon letétbe helyeztünk az Országos Közegészségügyi Intézetnél a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében. A bendőből származó mikroorganizmusok tenyésztését a találmány értelmében szén- és nitrogénforrást, szervetlen sókat, a táptalaj megfelelő redukált állapotát biztosító sókat és a sejtek osztódásához ismeretlen okok miatt esetenként nélkülözhetetlen bendőfolyadékot tartalmazó táptalajokon anaerob körülmények között, az oxigén kizárásával, előnyösen 32°C és 37°C közötti hőmérsékleten végezzük. Szénforrásként előnyösen például glükózt, cellulózt vagy ezekre metabolizálódó más adalékanyagokat, például szénát, abrakot, vagy melaszt használhatunk. Nitrogénforrásként szervetlen sókat vagy szerves készítményeket, például élesztőkívonatot, kazeint vagy más hasonlót adagolhatunk a táptalajhoz. A találmány szerinti eljárás lényeges pontja, hogy a kérődzők bendőflórájának befolyásolására olyan egysejtűeket használunk, amelyek egy adott takarmányt előnyösen képesek 5 4 metabolizálni és hosszú ideig életképesek maradnak a bendő körülményei között. Ilyen baktériumok kiválasztására az előzőekben megadottak értelmében szelekcióra alkalmas genetikai jelzéseket használunk fel. Ilyen genetikai jelzés lehet például egy antibiotikummal szembeni rezisztenciát kódoló gén, de lehet más, például bármely enzim vagy biológiailag nem aktív, de valamely reakcióval kimutatható fehérjét meghatározó gén is. Használhatunk továbbá auxotróf sejteket is. A genetikai jelzést a sejtbe egy vektor DNS molekula segítségévei, például plazmiddal vagy fággal juttathatjuk be, de spontán szelekcióval is kiválaszthatunk egy adott szelektálható tulajdonságot, például antibiotikum rezisztenciát. A kiválasztott, egy adott kérődző bendőjében előnyösen metabolizáló és ott hosszú időn át fennmaradó tenyészetet a bendőflóra születés utáni kialakítására vagy a már kialakult bendőflórával rendelkező állat bendőjében élő mikroorganizmus tömeg összetételének előnyös befolyásolására valamely célszerű készítmény formájában, orálisan adagoljuk az állatnak. Az adagolást célszerűen a takarmánnyal vagy az ivóvízzel együtt végezzük. Az adagolandó tenyészet előállítására a kiválasztott mikroorganizmust szerves széníorrást és szerves vagy szervetlen nitrogénforrást és szerves vagy szervetlen sókat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, majd adagolásba, illetve szállításra alkalmas alakban elkülönítjük és kívánt esetben szilárd, vagy folyékony halmazállapotú hordozó anyagokkal és adott esetben egyéb adalékkal összekeverve formulázzuk. Az így kapott készítmények az állatok takarmányához vagy ivóvízéhez keverhetők vagy önállóan is adagolhatok. A fermentáció után kapott tenyészléből ismert módon, például centrifugálással vagy szűréssel elkülönítjük a mikroorganizmus sejteket. Az elkülönített sejtekből készíthetünk többek között mikroorganizmus-pasztákat, fagyasztva szárított készítményeket, spórákat vagy vegetatív alakot tartalmazó szuszpenziókat stb., amikhez hozzáadjuk az állattenyésztési és állattakarmányozási szempontból elfogadható adalékanyagokat. A készítményekhez a mikroorganizmusok életképességét megőrző kiegészítő adalékanyagokat is tehetünk, például fehérjéket, aminosavakat vagy például glicerint. A kérődzők bendőflórájának kialakítására vagy befolyásolására használható, találmány szerinti készítményekhez adagolhatunk fentieken kívül a gyakorlatban használt és kérődzőknek adagolt anyagokat is, például antibiotikumokat, így monenzint, nigericint, szalinomicint stb., de adagolhatunk olyan vegyületeket, például antibiotikumokat is, amelyek elősegítik az adagolt mikroorganizmus fennmaradását a bendőben. A találmány szerinti eljárással előállított mikroorganizmus tenyészetek tehát lehetővé teszik, hogy segítségükkel a kérődzők bendő-6 5 1C 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
