193291. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív heptapeptidek és sóik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkkészítmények előállítására
A találmány tárgya eljárás biológiailag aktív új peptidek és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik, valamint a fenti vegyületeket hatóanyagként tartalmazó állatgyógyászati célra alkalmazható készítmények előállítására. A leírásban a peptidkémiában szokásosan használt szimbólumokat és rövidítéseket használjuk, a [Biochemistry 14, 449 (1975)] irodalmi helyen ismertetettek szerint. A találmány tárgya közelebbről eljárás az X-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-Y (I) általános képletű peptidek előállítására, a képletben X jelentése hidrogénatom vagy terc-butoxi-karbonil-csoport, és Y jelentése hidroxil- vagy aminocsoport, vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoport. Az 1-4 szénatomos alkoxicsoport metoxi-, etoxi-, n-propoxi-, izopropoxi-, n-butoxi-, szek-butoxi-, izobutoxi- vagy terc-butoxi-csoport lehet. A találmány szerinti eljárás az (1) általános képletű peptidek savakkal képzett gyógyászatilag elfogadható sóira is vonatkozik. A savaddíciós sókat különféle szervetlen vagy szerves savakkal, például kénsavval, foszforsavval, sósavval, hidrogén-bromiddal, hidrogén-jodiddal, salétromsavval, szulfaminsavval, citromsavval, tejsavval, piroszőlősavval, oxálsavval, maleinsavval, borostyánkősavval, borkősavval, fahéjsavval, ecetsavval, trifluor-ecetsavval, benzoesavval, szalicilsavval, glükonsavvai vagy aszkorbinsavval képezhetjük. A találmány értelmében a peptideket a szokásos módon, oldatban végzett peptidszintézissel állítjuk elő. A szintézis lényegében a védett aminosavak vagy peptidek megfelelő sorrendben végrehajtott kondenzálásából áll. A kondenzációs reakciókat úgy hajtjuk végre, hogy a kapott peptidek a hét aminosav-maradékot a kívánt szekvenciában tartalmazzák. A peptidkémiában önmagában ismert módon kondenzált aminosavaknak és peptideknek azon karboxil- és aminocsoportjait, amelyek nem vesznek részt a peptidkötés kialakításában, megfelelő védőcsoportokkal védjük. A védőcsoportok savas vagy lúgos hidrolízissel, vagy hidrogenolízissel eltávolíthatók. Az aminocsoportokat például benzil-oxi-karbonil-, terc-butoxi-karbonil-, tritil-, formil-, trifluor-acetil-, o-nitro-fenil-szulfenil-, 4-metoxi-benzil-oxi-karbon il-, 9-fluorenil-metoxi-karbonil-, 3,5-dimetoxi-a,a'-dimetil-benzil-oxi-karbonil- vagy metil-szuifonil-etoxi-karbonil-csoporttal védhetjük. A karboxilcsoport védésére például a metil-, etil-, terc-butil-, benzil-, p-nitro-benzil- vagy íluorenil-metil-csoport alkalmazható. Az egyik molekula aminocsoportja és egy másik molekula karboxilcsoportja közötti kondenzálást a peptidkötés kialakítása céljából valamely aktivált acil-származék — például vegyes anhidrid, azid vagy aktivált észter — 2 1 felhasználásával, vagy a szabad amino- és karboxilcsoport közötti közvetlen kondenzálással hajthatjuk végre, ez utóbbi esetben kondenzálószert — például diciklohexil- karbodiimidet — is használunk, önmagában, vagy egy racemizációt megakadályozó szerrel — például N-hidroxi-szukcinimiddel vagy 1 -hidroxi-benzo-triazollal — együtt. A kondenzálást oldószerben — például dimetil-íormamidban, pirid nben, acetonitrilben, tetrahidrofuránban vagy N-metil-2-pirrolidonban — hajthatjuk végre. A reakcióhőmérséklet —30°C és szobahőmérséklet közötti tartományban változhat. A reakcióidő általában 1 óra és 120 óra között lehet. A reakcióutat, védőcsoportokat és kondenzálószereket célszerűen úgy választjuk neg, hogy elkerüljük a racemizáció veszélyét. A védőcsoportok eltávolítását a peptidkémiában szokásos eljárások szerint végezhetjük. Azokat a peptideket, amelyek képletében Y 14 szénatomos alkoxicsoportot jelent, példáu úgy állíthatjuk elő, hogy kiindulási anyagként olyan aminosavat használunk, amelynek C-terminálisa a megfelelő alkohollal észterezve van. Az Y helyén OH csoportot tartalmazó peptideket például az Y helyén 1-4 szératomos alkoxicsoportot tartalmazó peptidek hidrolízisével állíthatjuk elő. Azokat a peptideket, amelyek képletében Y -NH2 csoportot jelent, a megfelelő észterek ammonolízisével állíthatjuk elő, vagy úgy, hogy a C-terminálisán a megfelelő aminnal amidált amhosavbói indulunk ki. A találmány szerinti eljárás végső kondenzációs lépésében előnyösen egy X-Val-Pro-Pro-OH (II) általános képletű vegyületet, vagy annak vegyes anhidridjét, aktivált észterét vagy azidját kondenzáljuk kondenzálószer — például diciklohexil-karbodiimid — és adott esetben egy racemizációt megakadályozó szer jelenlétében egy H-Leu-Gly-Trp-Met-Y (III) általános képletű vegyülettel - a fenti képletekben X és Y jelentése a fenti, azzal a megkötessél, hogy X jelentése hidrogénatomtól élté ő. \ találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek növekedést serkentő hatással rendelkeznek állatok esetén, amint azt a májszövetek protein-szintézisének in vivo—in vitro vizsgálatával [Kämmerer K. és Dey-Hazra A.: Vet. Med. Nachr. 2, 99-î 12 (1980)], illetve szubkután vagy orális kezalés esetén a kísérleti állatok súlygyarapodásának és táplálékhasznosításának dózis-függő növekedésével meghatároztuk. Protein-szintézis in vivo — in vitro vizsgál ata A növekedési vizsgálatot 6 db hím patkányból (Wistar, Hagemann, Extertal) álló csoportokon végeztük, 4 héten át. Az egyes csoportokat 3 állatból álló alcsoportokra osztva 2 193291 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
