193288. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált laktám-származékok előállítására

13

l93288

14

I. táblázat

Az angiotenzin átalakító enzim gátlása Az illető vegyület Az angiotenzin I-*angiopéldájának száma tenzin II átalakítás 50%-os gátlásához szükséges koncentráció

1. 1,0 x KV6 M

2. 2,0 x IO'6 M

3. 5,0 x 10'6 M

4. >1,0 x 1CT4 M

Az (I) általános képletü vegyületek az enkefalinok lebontásának is aktív gátlói. Az enkefalináz A aktivitását olyan,egerek agyának homogenizátumában (0,5 suly/térfogat%) mértük, melyekbe (I) általános képletü vegyületet injektáltunk és a fájdalomérzés hiányt vizsgáltuk. Az eredményeket a II. táblázatban adjuk meg.

II. táblázat

ln vitro enkefalináz gátlás Izolált-enzim vizsgálatok Vegyidet példaszáma Enkefalináz-MC5a

1. 56,2 x 1(T4 M

2. 4,0 x HT4 M

3. 3,7 x 10~7 M

4 Az enkefalináz A,-t Gorenstein és Snyder módszerével tisztítjuk [Life Sciences, 25, 2065 (1979)]. A hím Sprague-Dawley patkányok agyának homogenizátumát (30 térfogat 50 mM Tris.HCl pufferben, pH=7,4) 4200 x g-én 30 percen át centrifugáljuk. Az üledéket háromszor újra szuszpendáljuk és centrifugáljuk. A végső üledéket 10 térfogatnyi 1 % Triton x 100-at tartalmazó 50 mM Tris. HCl pufferben szuszpendáljuk. pH=7,4. 37°C hőmérsékleten történő 60 perces inkubáció után 90,000xg-én 60 percen keresztül centrifugáljuk, és az oldott enzimet DEAE-Biogel A oszlopra visszük, amit NaCI grádienssel eluálunk (0,0—0,4 M NaCI Triss pufferben, pH=7,4). Az enkefalináz A| aktivitást 100 nM [3H] -leu-enkefalin (specifikus aktivitás 43,6 Ci/mmól) alkalmazásával mérjük 20-100 pl térfogatban.A termékeket alumínium lemezre öntött vékonyrétegen kromatografálva választjuk szét. A 3H-Tir-Gli-Gli keletkezését standardok együttfuttatásával vizsgáljuk, a mennyiségi meghatározást a szétvágott kromatogrammon folyadék szcintillációs spektroszkópiával végezzük. Az IC5Q értékeket a Tir-Gli-Gli keletkezés gátlásával határozzuk meg, a kontroll értékekhez viszonyítva. Az IC60 értékeket 3 enzimkészítménynél határoztuk meg és összesen 8 meghatározás eredménye. Statisztikailag nem volt szignifikáns különbség.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletü - ahol R, jelentése 1 -3 szénatomos alkilcsoport, vagy benzilcsoport;

R2 jelentése 1-3 szénatomos alkilcsoport;

R3 jelentése hidrogénatom vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport -vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a (IV) általános képletü vegyületet - ahol R,, R2 és R3 jelentése a fenti meghatározásokkal azonos;

R4 jelentése benzilcsoport vagy 4-metoxi-ben

zilcsoport, -deblokkoló reagenssel reagáltatjuk.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ha az R4 jelentése benzilcsoport, deblokkoló reagensként elemi nátriumot, folyékony ammóniát és egy nem-reaktív alacsony olvadáspontú oldószert alkalmazunk.

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy, ha az R4 jelentése benzilcsoport, a deblokkoló reagensként forrásban lévő terc-butanolban vagy etanolban nátriumot alkalmazunk.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy, ha R4 jelentése benzilcsoport, deblokkoló reagensként anizolban hidrogén - f 1 uoridot alkalmazunk.

5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ha R4 jelentése 4-metoxi-benzilcsoport, deblokkoló reagensként oldószerben oldott trifluor-metánszulfonsavat alkalmazunk.

6. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, az (aS)-3-(merkapto-metil)-a,3-dimetil-2-oxo-1-pirrolidin-ecetsav előállítására, azzal jellemezve, hogy az (ctS)-3-(benzil-merkapto-metil ) -a,3-dimetil-2-oxo-1 - pi rrolid in-ecetsavat tetrahidrofuránnal elemi nátriummal és folyékony ammóniával reagáltatjuk.

7. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás az (aS)-3-etii-3-(merkapto-metii)-a-metil-2-oxo-l-pirrolidin-ecetsav előállítására, azzal jellemezve, hogy az (aS)-3-etil-3-(benzil-merkapto-metil) - a-met il-2-oxo-1-pirrol id in - -ecetsavat fémnátriummal és folyékony ammó niával reagáltatjuk.

8. Az 1. vagy 5. igénypont szerinti eljárás, az (aS,3R)-3-(merkapto-metil)-cx-metil-2-oxo-3-benzil-1-pirrolidin-ecetsav előállítására, azzal jellemezve, hogy etil- (otS) -3- [ (4- -meíoxi-benzil)-merkapto-metil ) ] - a-met il-2- -oxo-3-benzil-l-pirrolidin-acetátot anizolban trifluor-metánszulfonsavval reagál tatunk.

9. Az 1, vagy 5. igénypont szerinti eljárás az (S,S)-3-(merkapto-metil)-a-metil-2- -oxo-3-benzil-1 -pirrolidin-ecetsav előállításé ra, azzal jellemezve, hogy etil- (aS)-3- [ (4-met oxi-benzil) - merkapto-metil] -ec-metii-2-oxo-3- -benzil-l-pirrolidin-acetátot anizolban trifluor -metánszulfonsavval reagál tatunk.

10. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-9. igénypontok bármelyike szerint előállított (I) ál talános képletü vegyületet, ahol R,, R2 és R3 az 1. igénypontban megadott, gyógyszerkészítmények előállításánál alkalmazható adalékanyagokkal szokásos dózisformává alakítunk.

c,

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

8

2 lap képletekkel