193238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indanil-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszer-készítmények előállítására
1 193238 2 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű indanilszármazékok, valamint az ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Az (1) általános képletben R, és R2 azonosan vagy eltérően hidrogénatomot, fluoratomot vagy klóratomot jelent. Az (1) általános képletű vegyületek előállítására szolgáló eljárást az jellemzi, hogy valamely (II) általános képletű indanilszármazékot, ahol Rj és R2 jelentése a fentiekben megadott, az Aspergillus niger vagy a Polyporus tulipiferus élő tenyészetével fermentálunk. A találmány szerinti eljárást olyan körülmények között valósítjuk meg, mint amilyeneket szubsztrátumok gombatenyészetekkel történő mikrobiológiai hidroxilezésére szoktak alkalmazni. így az általában szokásos előkísérletekkel előbb meghatározzuk a legalkalmasabb fermentációs körülményeket, példának okáért kiválasztjuk a leginkább megfelelő táptalajt, a szubsztrátum oldására vagy szuszpendálására legmegfelelőbb oldó- vagy szuszpendálószert, meghatározzuk a szubsztrátum koncentrációját és az eljárás technológiai körülményeit. Ezeket a paramétereket, így a hőmérsékletet, a levegőztetés mértékét, a pH-t, az előfermentálás .optimális idejét, a szubsztrátum hozzáadásának és a mikroorganizmus enzimrendszerével való érintkezésnek optimális idejét analitikai módszerekkel, különösen vékonyréteg-kromatográfiás úton határozzuk meg. Célszerűnek bizonyult, ha a szubsztrátumot a táptalaj egy literjére számítva kb. 100-2000 mg koncentrációban alkalmazzuk, és emellett a pH-t előnyösen 5-7 közötti értékre állítjuk be. A tenyésztési hőmérsékletet 20-40°C között, előnyös módon 25-35°C között választjuk meg és a levegőztetést egy liter fermentlére számítva előnyösen 0,5-5 liter levegő bevezetésével valósítjuk meg. A. szubsztrátum átalakulását célszerűen az egyes próbákból kapott kivonatok analitikai vizsgálatával követjük nyomon. A fermentációhoz szükséges mikroorganizmusok a szakemberek előtt jól ismert mikroorganizmus-gyűjteményekből szabadon hozzáférhetők. Alkalmas mikroorganizmusok például az Aspergillus niger ATCC 10577 és NRRL 3228, vagy a Polyporus tulipiferus CBS 43148 számon nyilvántartott törzsek. A fermentáció lefolytatása után a fermentációs termékeket önmagukban véve ismert módszerekkel izoláljuk. A termékek izolálását például úgy végezhetjük, hogy a fermentációval kapott tételt valamilyen vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, így etil-acetáttal, butil-acetáttal vagy métil-izobutil-ketonnal extraháljuk, majd a kivonatokat bepároljuk és az így kapott nyers terméket adott esetben kromatografálással és/vagy kristályosítással tisztítjuk. A találmány szerinti vegyületek kitűnő gyulladáselíenes (antiflogisztikus) hatásukkal tűnnek ki. Ezen túlmenően a találmány szerinti vegyületek még fájdalomcsillapító, menstruációs zavarok elleni, lázcsökkentő, a trombociták aggregációját gátló és vizelethajtó hatással is rendelkeznek, mimellett figyelemreméltó az a tény, hogy a szóban forgó vegyületek a prosztaglandin-szintézist alig gátolt'ák. Igen nagy előnye ezeknek a vegyületeknek, logy a terápiás hatás és a nem kívánt mellékhatások (így különösen az ulcerogenetikus, vagyis Tekélyképződést előidéző mellékhatás) közötti megoszlás— az előbbi javára —igen kedvező. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek gyulladásgátló hatását az ismert adjuváns arthitis teszttel határoztuk meg, az alábbiak szerint. A vizsgálatokat Lewis törzshöz tartozó, 110-190 g testsúlyú nőstény és hím patkányokkal végeztük. Az állatok annyi ivóvizet és préselt Altromin takarmányt kaptak, amenynyit képesek voltak elfogyasztani. Minden adag vizsgálatához 10 patkányt használtunk. Izgatóanyagként a Difco cég (Detroit) Mycobacterium butyricumot tartalmazó készítményét alkalmaztuk. 0,5 g Mycobacterium butyricum 0,1 ml híg folyós paraffinnal (7. Német Gyógyszerkönyv) készített szuszpenzióját az állatok jobb hátsó talpába subplantárisan beadtuk. A vizsgálandó anyagokat a kísérlet 11. napjától kezdődően naponta, 4 napon át orálisan adagoltuk. A vizsgálandó vegyületeket vagy vizes oldat vagy izotóniás, nátrium-klorid-oldatban, Myri 53 (85 mg%) hozzáadásával készített kristályszuszpenzió alakjában adagoltuk. A patkányokat testsúlyuk alapján—megközelítően azonos súlyúakat—soroltuk az egyes csoportokba. Jobb hátsó talpuk pletizmográfiás térfogatmérése után abba szubplantárisan 0,1 ml adjuvánst fecskendeztünk. Az állatok jobb hátsó talpának térfogatát a kísérlet 14. napjától a kísérlet befejezéséig mértük. A kísérlet időtartama 3 hét. A hátsó talpnak az alkalmazott adag hatására bekövetkezett gyógyulását határoztuk meg. Az alábbi táblázat a vizsgálat eredményeit mutatja be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 2
