193227. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,5-diszubsztituált-4(3/1)-pirimidon-származékok előállítására
193227 A vizsgált vegyületet ezután szájon át, gyomor-intubálással, 2 ml/kg térfogatban adjuk be. Negyvenöt perc elteltével a lezáró csavart ismét eltávolítjuk, visszatesszük a katétert, melyhez a kis műanyag csövet erősítettük, és újabb kétórás mintát gyűjtünk. A második mintában lévő gyomornedvet a kontroll mintában lévő gyomornedvhez hasonlítjuk, hogy a vizsgált vegyület hatását megállapítsuk. Ha a vizsgált vegyületeket parenterálisan értékeljük az állatot ip. vagy se. injekciózzuk 2 ml/kg térfogatban a vegyület hordozójával, közvetlenül azután, hogy a kezdő, 60 perces mintát eldobtuk. Kétórás mintát veszünk (kontroll gyomornedv) majd az állatokat ip. vagy se. injekciózzuk a vizsgált vegyülettel 2 ml/kg térfogatban. Üjabb kétórás mintát veszünk, majd a vegyület hatásainak meghatározása céljából ezt a mintát a kontroll mintához hasonlítjuk. 1. Tábláza 5 6 Gyomor-kiválasztást gátló hatás gyomor-fisztulás patkánynál Vegyület EB50 sc uniói/kg Hatás-arány (cimetidin = 1,0) cimetidin 3.48 1.0 (2.3-5.5)* 2. példa 0.15 26 vegyülete (0.08-0.2)* (13-50)* * 95%-os konfidencia-tartomány A mintákat lecentrifugáljuk és egy térfogat-osztásos centrifuga-csőbe helyezzük a térfogat meghatározása céljából. A titrálható savasságot úgy mérjük, hogy egy egy millili- 5 teres mintát 0,02 N nátrium-hidroxiddal pH 7.0- -ig titrálunk, egy Autoburet készüléket és elektromos pH-mérőt (Radiometer) használva. A titrálható sav-kiválasztást mikro-ekvivalensekben számoljuk, a milliliterben mért térfo- 10 gatot a milliekvivalens per literben mért savkoncentrációval szorozva. Az eredményeket a kontroli-leolvasásokhoz viszonyított százalékos gátlásban fejezzük 1 g ki. Dózis-hatás görbéket készítünk, az ED50 értékeket regressziós analízissel határozzuk meg. Minden dózis-szinten legalább három patkányt használunk és legalább három dózis-szintet használunk a dózis-hatás görbe elkészítéséhez. Gyomor-kiválasztást gátló aktivitás meghatározása Heidenhain Pouch kutyáknál A műtét előtt megállapítjuk a hematológiai és vér-kémiai adatokat, majd megbecsüljük a kiválasztott nőstény kutyák általános egészségi állapotát. A kutyákat Tissue Vax 5-tel (DHLP-Pitman-Moore) oltjuk be, és általános állattartó részlegekben négyheti megfigyelésnek vetjük alá, hogy a lappangó betegségek megnyilvánuljanak. A műtét előtt 24 óráig éheztetjük a kutyákat, miközben tetszés szerinti mennyiségű vizet ihatnak. Az érzéstelenítést Pentotál-nátriummal végezzük (Abbott), 25-30 mg/kg intravénás dózisban. Az érzéstelenítést ezután metoxifluoránnal (Pitman-Moore) tartjuk fent. A kardnyúlványtól a köldökig terjedő középvonal linea alba bemetszés jó hozzáférhetőséget és könnyű zárást biztosít. A gyomrot kihúzzuk az operációs területre, a nagyobb görbületet több ponton kifeszítjük és a bemetszés kivár lasztott vonala mentén kampókat helyezünk el. A zsebet a gyomor-testből készítjük, így igazi fali sejt-nedvet kapunk. A gyomor térfogatának körülbelül 30%-át kivágjuk. A kanült könnyű, biológiailag semleges anyagból, például nylonból vagy Delrin-ből készítjük, a méretezést és a csatlakozást DeVito és Harkins [J. Appl. Physiol., 14, 138 (1959)] leírása 4 alapján végezzük. Operáció után az állatokat antibiotikumokkal és fájdalomcsillapítókkal 40 kezeljük. 2-3 hónapot adunk nekik, hogy rendbejöjjenek. A kísérleteket a következőképpen végezzük: Minden egyes kísérlet előtt a kutyákat éjszakán át (körülbelül 18 óra) éheztetjük, közben annyi vizet ihatnak amennyit akarnak A kutyákat szorítóhámba tesszük, és egy rózsaér-vénába kanült helyezünk a gyógyszer beadása céljából. Alapként hisztamint (100 pg/ /kg/óra) és klór-feniramin-maleátot (25 mg/ /kg/óra) adagolunk folyamatosan (6 ml/óra 50 térfogatban) Harvard infúziós szivattyúval. Kilencven-perces infúziót adunk a kutyáknak, hogy a sav-termelés állandó szintjét elérjék. Ebben az időpontban a vegyületet vagy normál só-oldatot (kontroll) adunk a secre- 55 tagogue-val egyidőben 0,5 ml/kg térfogatban egy 30 másodperces periódus alatt. Orális vizsgálatok esetén a vegyületet gyomorszondán át adjuk be 5 ml/kg térfogatban. A secretagoue infúzióját folytatjuk és 4,5 órán át 60 15 percenként mintát veszünk a gyomornedvből. Minden egyes minta térfogatát a legközelebbi 0,5 ml-re kerekítve mérjük és a titrálható savasságot egy milliliter mintát 0,2 N nátriumhidroxiddal 7,0-ig titrálva határozzuk meg, „ Autoburet-et és elektromos pH mérőt (Radiometer) alkalmazva. A titrálható sav mennyi-
