193087. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új LL-D 42067 alfa és LL-D 42067 béta antibiotikumok és hatóanyagként ezeket tartalmazó állatgyógyászati készítmények előállítására
12 11 Az LL-D 42067 a és LL-D 42067 ß antibiotikumokat egy új Actinomadure madurae mikroorganizmus törzs termeli, ellenőrzött körülmények között végzett tenyésztés során. Az új törzset a Medical Research Division, American Cyanamid Company, New York törzsgyűjtéményében tartjuk fenn, LL-D 42067 a és LL-D 42067 ß szám alatt. Az új mikroorganizmus csíraképes tenyészetét letétbe helyeztük a Patent Culture Cpllection Laboratory, Northern Regional Research Center, U.S.Department of Agriculture, Peoria, Illinois 61604 és ott NRRL 15734 katalógusszámon vették fel az állandó gyűjteménybe. Az új antibiotikum-termelő mikroorganizmus törzset egy San Simao, Brazíliában gyűjtött talajmintából izoláltuk. Az új törzset osztályoztuk és „Actinomadure madurae simaoensis"-nak neveztük el. A mikroorganizmus tenyésztési, fiziológiai és morfológiai jellemzőinek megfigyelését Shirling and Gottlieb [Intern. J. Systerm. Bacteriol., 16: 313-340 (1966)], és Gordon, et al. [Intern. J. Systerm. Bacteriol., 24: 54-63 (1974)] módszere szerint végeztük. A sejtfalak összetételét Lechevalier, et al. [Adv. Appl. Microbiol., 14: 47-72 (1971)] határoztuk meg. A vizsgálatok eredményeit az 5-7. táblázatokban foglaljuk össze. A táblázatokban az aláhúzott jellemző színeket Kelly and Judd [Nat. Bur. Stand., Spec. Publ., 440 (1976)] és Intersociety Color Council, National Bureau of Standards Centroid Co]os Charts.] meghatározásai szerint adtuk meg. A szaporodás mértéke Az LL-D 42067 termelésére alkalmas tenyészeteket az International Streptomyces Project Committee (ISP) által ajánlott különféle agar táptalajokon tenyésztettük, amelyek jellemzőit az 5. táblázatban adjuk meg. Mikromorfológia Mikroszkópos vizsgálattal megállapítottuk, hogy a tenyészetben rövid spóraláncok alakulnak ki és a gombafonalak rövid spirálokká (háromfordulatú) hurkolódnak. A spórák felülete elektronmikroszkópos vizsgálattal simának látszik, ami megkülönbözteti az A.verrucosporától. Sejtfalösszetétel A teljes sejt analízis szerint a törzs mezo-diamino-pimelinsavat (DAP) és 3-o-metil-d-galaktózt tartalmaz; a teljes sejtfal B típusú. 5 A sejtfal összetétele III. típusú (mező DAP, glutaminsav, alanin, muraninsav és glükózamin) és a foszfolipid PIV típusú (foszfatidil-etanol-amin és/vagy metil-etánol-amin és egy ismeretlen glükózamin tartalmú foszfolipid). Ezen jellemzők alapján nyilvánvaló, hogy a törzs az Actinomadúra nemzetségbe tartozik. A PIV típusú foszfolipid nem tipikus az A. madurea-ra, ami szokásosan Pl típusú. Fiziológiai reakciók 15 Az LL-D 42067 a és LL-D 42067 ß törzsek fiziológiai reakcióit Shirling és Gottlieb [Inter J. Syst. Bacteriol., 16: 313-340 (1966)] és a Gordon tests, Gordon et al. [Intern. J. Syst. Bacteriol., 24: 54-63 (1974)] módszere szerint 2® végezzük. A szénhidrát hasznosítás adatait a nemzetségbe tartozó hasonlóképpen reagáló más törzsekkel együtt a 6. táblázatban foglaljuk össze. 2$ Az LL-D 42067 az Actinomadúra madurae és Actinomadure verrucosopora csoportokhoz hasonlóan viselkedik, bár amint a fentiekben jeleztük, különbözik az Actinomadúra verrucosoporától, mivel sima spórafalakkal rendel- 30 kezik. Az LL-D 42067-et és az Actinomadúra maduraet Gordon szerinti vizsgálati sorozatban összehasonlítottuk. (Gordon adatai a fent idézett közleményben találhatók). Az eredményeket a 7. táblázatban foglaljuk ösz- 35 sze. Különbséget csak az amiláz és a glicerinből és raffinózból termelt savtermelésben találtunk. M vei az amiláz-termelés és a raffinóz-hasznosítás az Actinomadúra madurae esetében 40 is változó lehet, amint azt Goodfellow és társai a J. Fen. Microbiol., 112: 95-111 (1979) irodalmi helyen kifejtik, csak a glicerin reakcióban van különbség. Mivel az LL-D 42067 törzs a glicerin reak- 45 ciot és a foszfolipid PIV típusát kivéve ugyanolyan fiziológiai tulajdonságú, mint az Actinomadura madurae, ennek alfajába, Actinomadura madurae simaoensis-ba sorolható be. ^.táblázat Actinomadúra madurae simaoensis-ba tartozó LL-D 42067 tenyésztési jellemzői ISP morfológiai táptalajokban Agár táptalaj Légmicélium Vegetatív micélium Oldható festék élesztő kivonat , maláta kivonat (ISP 2) fehér kÖ2ép narancs , barna 153 X nincs Szervetlen sók, keményítő (ISP 4) színtelen színtelen nincs Glükóz-aszparagin (ISP 5) színtelen színtelen nincs Zabliszt halvány róvilágos nincs (ISP 3) zsaszínes narancs, barna 152* x = ISCC szinmeghatározás szerint
