193051. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin előállítására új streptomyces törzzsel
1 193051 2 cetales, Baltimore, 1961/, a következő eltéréseket találtuk: A Streptomyces noursei NX /MNG-00255/ törzs számos táptalajon /glükóz-aszparagin, keményítő,tirozin, élesztőkivonat-maláta, glicerin-nitrát, zabliszt, kálcium-malát, paradicsom agar/ szürkés-sötétszürkés színű telepeket /légmicéliumot, spórákat/ fejleszt, szemben az ATCC-11455 törzs fehér-világosszürke színével. Emellett az NX /MNG-00255/ törzs spóraképződése nagyon jó néhány táptalajon /glicerin-nitrát, kalcium-malát agar/, míg az ATCC-11455 törzsé gyenge. Eltérést találtunk a szénhidrát hasznosításában is, az NX /MNG-00255/ törzs közepesen-gyengén hasznosítja a maltózt, szorbózt, szorbitot, míg az ATCC-11455 törzs nem hasznosítja ezeket a szénhidrátokat /maltózt gyengén/. A fentiekben részletezett rendszertani vizsgálataink alapján tehát az új NX jelű /MNG-00255/ Streptomyces törzs a Streptomyces noursei alfaja, neve: Streptomyces noursei ssp. albidus. Kísérleteinkben a nisztatint termelő új törzs, a Streptomyces noursei ssp. albidus NX termelőképességének növelésére a törzs spóra szuszpenzióját — ismert módon — mutagén behatásnak tettük ki, majd a mutagén kezelés után speciális szelektív táptalajokon választottuk ki a stabil, nagy termelőképes- 5 béggel rendelkező telepeket. Mutagénként ultraibolya besugárzást, salétromossavat, illetve nitrozoguanidint alkalmaztunk, de alkalmazhatunk a szakirodalomból ismert bármely mutagént, így példá- 10 ttl röntgen-sugárzást, gamma-sugárzást, nitrogénmustárokat, stb. is. A speciális szelektív szilárd táptalajban nátrium-arzenátot alkalmaztunk, majd erről a táptalajról kukoricalekvár agarra izoláltuk át 15 a telepeket.Kísérleteinkben azt a meglepő megfigyelést tettük, hogy az arzenát tartalmú táptalajon szelektált törzsek nisztatin-termelő képessége nagyobb, mint az arzenátot nem tartalmazó táptalajról izolálhatóké.A megfigye- 20 lés bizonyosan összefügg azzal, hogy bizonyos «foszfát érzékeny» Streptomyces törzsekben a táptalaj szervetlen foszfát tartalma az antibiotikum bioszintézisét gátolja adott koncentráció fölött /Donovick és munkatársa: Bioge- 25 nisis of Antibiotic Substances, 281-286 oldal, Academic Press, 1965/. Kísérleteinket a következő táblázat szemlélteti: Izolált mutánsok száma Nisztatin termelőképessége a kiindulási törzs %-ában 85 85-115 115-130 130 % % % % Mutagén kezelés, majd aszparagin agaron szélesztés 145 15 124 6-Mutagén kezelés, majd szelektív arzenát tartalmú agaron szélesztés 182 11 139 29 3 Az alkalmazott szelektív táptalaj összetétele: Kukoricalekvár Burgonya keményítő Ammóniumszulfát Nátriumktorid Kalciumkarbonát Nátrium arzenát Agar 1,0% 1,0% 0,3% 0,3% 0,3% 20 pg/ml 2,0% Az arzenátot tartalmazó aszparagin agáron kifejlődött telepek közül tehát nagy számban voltunk képesek izolálni nagyobb termelőképességű törzset. A kísérleteinkben ipari fermentációs szempontból legalkalmasabbnak bizonyult egyik ilyen törzs a Streptomyces noursei ssp. albidus NXO-9 törzs,amelyet az Országos Közegészségügyi Intézetben, a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében letétbe helyeztünk, 1983. III. 1-én, 00256 szám alatt.Az új mutáns törzs előnyös tulajdonsá-4 gai közül kiemeljük.hogy a magas nisztatin termelőképessége mellett egyaránt jól hasznosítja szén forrásként a glükózon kívül a különböző ipari minőségű szénhidrátokat,így a kukori- 50 calisztet,kukorica keményítőt,burgonya kemény: tőt,búza lisztet,búza keményítőt,a mi lázzal elfolyósított búza- és kukoricalisztet, valamint keményítőket, továbbá nitrogén forrásként szójalisztet, mogyorólisztet, ku- 55 koricalekvárt, ammóniumnitrátot.ammóniumszulfátot, ammóniumkloridot, stb. Találmányunk szerint nisztatin előállítására tehát úgy járunk el, hogy a Streptomyces noursei ssp. albidus NX törzset, vagy mu- 60 tagén behatás után szelektív táptalajon kiválasztott utódait, előnyösen a Streptomyces ssp. albidus NXO-9 törzset asszimilálható szén- és nitrogén forrást előnyösen szójalisztet és/vagy kukoricá!ekvárt,amilázzal elfolyósí- 6g tott kukoricalisztet és/vagy kukoricakeményítőt, és ásványi sókat, előnyösen ammonium-,
