193051. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin előállítására új streptomyces törzzsel
193051 Találmányunk tárgya eljárás nisztatin előállítására mikrobiológiai úton, a Streptomyces noursei mikroorganizmus fajhoz tartozó törzzsel, aerob fermentációval, asszimilálható szén- és nitrogénforrást, ásványi sókat tartalmazó táptalajon, olymódon, hogy az alkalmazott mikroorganizmus a Streptomyces noursei ssp. albidus NX törzs vagy mutagén behatás után szelektív táptalajon kiválasztott utódai, előnyösen az NXO - 9 törzs, majd a fermentáció folyamán keletkezett antibiotikumot- a fermentléből elkülönítjük. Ismeretes, hogy a nisztatin egy polten, makrolid gombaellenes antibiotikum, amelyet Streptomyces törzsekkel, főleg Streptomyces noursei törzsekkel állítanak elő /Advances in Applied Microbiology, 21. kötet, Academic Press, 1977/. Ismeretes továbbá, hogy — 1950-ben történt felfedezése óta /Science 1_12, 423, 1950/ — a nisztatin termelés fokozására a termelő mikroorganizmus törzseket mutagénekkel kezelték /pl. 866.600. számú nagybritanniai, 1.052.065 számú NSZK-beli szabadalmi leírások, Spizek és munkatársai: Folia Microbiol. H), 259, 1965, Toropova és munkatársai: Antibiotiki 17, 398, 1972/, valamint a mutagén behatás után sztreptomicin tartalmú táptalajon választották ki a nagyobb termelőképességű törzseket /150.018 számú magyar szabadalmi leírás/.A nisztatin termelés fokozását eredményezte a fermentációs táptalajok módosítása,így a táptalaj természetes eredetű polimerjeinek elfolyósítása hidrolizáló enzim/ek/kel /167 248 számú magyar szabadalmi leírás/.Mindezekben a szabadalmi leírásokban illetve tudományos közleményekben leírt eljárások azonban csak viszonylag alacsony, 10-15000 E/ml, illetve 30- 40000 E/ml nisztatin tartalmú fermentlevet eredményeztek. /A nisztatin biológiai aktívítására.továbbá analitikai meghatározására vonatkozó összefoglaló: Analytical Profiles of Drug Substances, Vol. 6, Academic Press, 1977/. Találmányunk szerint a nisztatin előállítására új Streptomyces törzset izoláltunk, majd — ismert — mutagén behatás után speciális szelektív táptalajon választottuk ki utódait, ezekkel az új törzsekkel a nisztatint nagyobb koncentrációban, igen gazdaságosan tudjuk előállítani. A találmányunk szerinti eljárással tehát új Streptomyces törzzsel állítjuk elő a nisztatint. Az új Streptomyces törzs morfológiai, fiziológiai és biokémiai tulajdonságai alapján a Streptomyces noursei faj alakkörében tartozik, mégis — részletes rendszertani vizsgálataink alapján — megállapítható, hogy az új törzs több rendszertani bélyeg alapján elkülöníthető az autentikus Streptomyces noursei fajtól, új alfajnak minősül. Bizonyos szilárd táptalajon kifejlődő jellegzetes szürkés színű telepei i 2 miatt az új törzs a Streptomyces noursei ssp. albidus nevet kapta. Az új törzset, a Streptomyces noursei ssp. albidus NX jelű törzset letétbe helyeztük az Országos Közegészségügyi Intézetnél, a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében, 1983. III. 1-én, 00255 sz. alatt. Az NX /MNG-00255/ törzsre vonatkozó rendszertani vizsgálatok eredményei: 1. Morfológiai tulajdonságok Hosszú, elágazó, válaszfal nélküli fonalak, fonál-átmérő 0,5-0,8 p. A spóratartók a léghifák oldal-ágaiként jelennek meg, általában nyitott spirális alakban. A spórák tojásdadgömb alakúak, méretük 0,6-0,8 p x 0,8— 1,2 p. 2. Tenyésztési tulajdonságok különböző táptalajokon 2.1 Szacharóz-nitrát ágar: nincs növekedés. 2.2. Glükóz-aszparagin agar: jó növekedés, szürke-rózsaszínes telepek, jó spóraképződés. 2.3. Glicerin-aszparagin agar: közepes-gyenge növekedés,sárga színű telepek, gyenge spóraképződés. 2.4. Keményítő agar: jó növekedés,szürkés színű telepek, közepes spóraképződés. 2.5. Tirozin agar: jó növekedés, fehéres-szürkés színű telepek, jó spóraképződés. 2.6. Táp agar: jó növekedés, fehéres-sárga színű telepek, gyenge spóraképződés. 2.7. Élesztőkivonat-maláta agar: jó növekedés fehéres-szürke színű telepek,jó spóraképződés. 2.8. Zabliszt agar: jó növekedés, sötétszürke-zöldes színű télepek, jó spóraképződés. 2.9. Glicerin-nitrát agar: jó növekedés, szürkés Színű telepek, jó spóraképződés. 2.10. Kálcium-malát agar: jó növekedés,szürkésfehér színű telepek,jó spóraképződés. 2.11. Bennett agar: jó növekedés,fehér színű telepek, közepes spóraképződés. 2.12. Emmerson agar: jó növekedés, drappsárgás színű telepek,nincs spóraképződés. 2.13. Pepton-vas agar: jó növekedés, drappsárgásbarna színű telepek,nincs spóraképződés. 2.14 Paradicsom agar: jó növekedés, rózsaszínű szürkés színű telepek, nincs spóraképződés. 2.15.Czapek agar /glükóz/: jó növekedés, szürkésfehér színű telepek, gyenge,vagy nincs spóraképződés. 3. Biokémiai és fiziológiai tulajdonságok A Streptomyces noursei NX /MNG-00255/ törzs jól növekszik 25-37°C-on, nem növekszik 45°C fölötti hőmérsékleten. Hidrolizálja a zselatint, koagulálja a tejet, a nitrátot gyengén redukálja nitritté. A szénforrás hasznosítást Czapek táptalajon vizsgáltuk, szacharóz helyett a vizsgálandó szénforrást használva: 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
