193029. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karboxialkanoil-peptid-alkilamid-származékok előállítására

1

193029

A találmány tárgya eljárás az /I/ általános képletű /karboxi-a!kanoil/-peptid-/alkil-amid/-származékok előállítására. Az /I/ képletben

R jelentése 1-5 szénatomos, egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoport vagy aralkilcsoport, különösen fenil-etil-csoport;

A jelentése pepiid kötésű prolii- vagy alanilcsoport;

B jelentése peptid kötésű prolii- vagy alanilcsoport-,

X jelentése -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- vagy -CH — CH-csoport; és n értéke 0 vagy 1.

A dipeptid-/alkil-amid/-származékok hatásos elasztáz-gátlók /lásd a 855 851 számú és 856 064 számú belga szabadalmi leírást/. Ebben az esetben olyan dipeptid-szekvenciákról van szó, amelyek aminosavösszetétele az elasztolitikus /elasztáz enzimmel hasítható/ szubsztrátum szempontjából optimális; ilyen dipeptid-szekvencia például az alanil-alanin vagy az alanil-prolin. A fentebb idézett szabadalmi leírásokban azonban nem vesznek figyelembe teljes mértékben néhány új ismeretet, amelyek az elasztáz enzim és a szubsztrátum közötti kölcsönhatásra vonatkoznak, és a tapasztalatok szerint egy hatásos gátló anyag funkciója szempontjából döntő szerepet játszanak. Korábbi közlésekben, amelyek szerzői a hasnyálmirigy-elasztáz enzim szempontjából optimális szubsztrátummal foglalkoznak, megállapították, hogy az enzim és a szubsztrátum kölcsönhatása szempontjából a P4- -S4 és P5 - S5 közötti elektrosztatikus kötődés

döntő jelentőségű [J. Schechter és A. Bergen Biochem. Biophys. Res. Commun. 32, 898 /1968/], és ez már az elsődleges kölcsönhatás előtt előnyben részesül [Eur. J. Biochem. 69, 5 1 /1976/, FEBS Lett. 40, 353 /1974/J.

Vlegiepő módon arra a megállapításra jutottunk, hogy a gátló anyag /inhibitor/ N-terminális részén lévő karboxilcsoport egy hid'ofób csoporttal /például az acetilcsoport- 10 tál/ összehasonlítva a gátlóképességet lényegesen fokozza, amint ezt az ilyen típusú szubszt átumok elasztolitikus hidrolízise állandóinak a növekvése mutatja. Egy elasztolitikus gálló anyag tulajdonságai Ugyanúgy függe- 15 nek a peptidlánc hosszúságától, mint a szubsztrátumok sajátságai [Eur. J. Biochem. 69, 1 /1076/] ; egy tripeptid gátlóképessége nagyobb, mint egy dipeptidé. In vitro kísérletek soián meghatároztuk a 3-karboxi-propionil- 20 és 4-karboxi-butiril-di- és tripeptidek gátlási állandóit /K< értékeit/, mégpedig a hasnyálmirigy-elasztáz és egy kromogén /színképző/ sz ibsztrátum segítségével: szubsztrátumként sz ikcinil- vagy glutaril-tetraalanin-p-nitro- 25 -a lalidet alkalmaztunk. E vizsgálatok eredményeit az 1. táblázat mutatja. Hasonló módon határoztuk meg az új inhibitorok gátlási állandóit /Ki értékeit/ humán elasztáz enzim-azaz emberi duodenumból származó elasztáz-segít- 30 ségével, kolecisztokininnel /E,/ végzett stimulálás után, illetve emberi hasnyálmirigy vezetékének kanülözésével kapott, liofilizált hasnyálmirigynedv /E 2/ segítségével, és összehasonlítottuk a sertés hasnyálmirigyéből 35 kapott elasztázzal /E3/. E kísérletek eredményei a 2. táblázatban láthatók.

2

1. táblázat

Acilezett di- és tripeptid-/a kil-amid/-származékok gátlási állandói /Kt é rtékei/

A gátló anyag

/pjmól/

Suc-/ála/4 -NAn

Glt-/Ala4 -NAn

Suc-/Ala/a -NH-Et

95,2

166

Glt-/Ala/g -NH-Et

68,1

109

Sue-/Alá4 -NH-EtPh

1 456

666

Glt-/Ala/a -NH-EtPh

982

770

Sue-/Ala/, -NH-Me

510

680

GIt-/Ala4 -NH-Me

280

320

Suc-/Ala/ä -NH-Et

20

29

Glt-/Ala/j -NH-Et

8,8

8,4

Mal/Ala/, -NH-Et

35

30

Ac-/Ala/5 -NH-Et

28

46

Suc-/Ala/3 -NH-Pr

6,8

4,5

Glt-/Ala/ä -NH-Pr

2,5

2,5

Suc-/Ala/3 -NH—iBu

816

1 474

Gl t-/Ala/, -NH-iBu

668

794

Suc-Ala-Pro-NH-Et

1 1 1

80

Suc-Ala-Pro-NH-iBu

2 042

5 747

Suc-Ala-Ala-Pro-NH-E t

2,5

4,7

Glt-Ala-Ala-Pro-NH-Et

1,6

2,7

2