192989. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fiziológiailag aktív hormon készítmények előállítására
18 192989 19 Egység: beütés/perc/mg porc I) példa Csökkent specifitású poliklón antitestek alkalmazása Subtilisin alkalmazásával C-terminális hGH-ról 7K (7000 Dalton) fragmenst hasítottunk, majd denaturáló körülmények között (Aston R. és Iványi J.: The EMBO Journal 2, 1983, 493-497) kromatografáltuk. 50 pl fragmenst Freund féle komplett adjuvánssal emulgeáltunk és hordozóanyag nélkül 2 egérbe beinjekcióztuk, majd 21 nap elteltével további 50 m9 fragmenst adagolunk adjuváns 5 nélkül. E második adagolás után 10 nappal vettük le a szérumot, 10 pg hGH-val komplexet képeztünk belőle és a kapott anyagot törpe egerekbe injekcióztuk. A növedés mértékét a “SO* felvétel meghatározásával kö- 10 vettük. A kapott eredmények, amelyeket a következő 9. táblázatban foglaltunk össze, a poliklón antiszérum nővekedésgyorsító hatását mutatják. 9. Táblázat Kezelés “S04 felvétel (c.p.m./mg. porc) Sóoldat 500 ± 50 hGH (10 Mg) 1365 ± 146 hGH + antiszérum I 4425 ± 703 hGH + antiszérum II 3272 ±471 Törpe egereket, amelyeket oGH-nal 30 reagálni képesek, hatos csoportokba osztottunk és két egymást követő napon, a 35SO* adagolását megelőzően 50 pg hormonnal, illetve a fenti antitesttel komplexbe vitt hormonnal kezeltük őket. A bordaporcokat 24 35 óra múlva távolítottuk el, hangyasavban feloldottuk és meghatároztuk a rádioaktlvitását. Az eredményeket a következő 10. táblázatban foglaltuk össze. 40 10. Táblázat J) példa Juh növekedési hormon hatásának fokozása Az 1. példában leírtak szerint juh (pl. birka) növekedéshormon elleni monoklón antitestet állítottunk elő, mely a következő helyen szerezhető be: Department of Experimental Immunobiology, Wellcome Research Laboratories, Langley Court, Beckenham, Kent, BR3 3BS, UK. Kezelés MAB konc. 35SO* felvétel (középérték ± eltérés; cpm/mg szövet) oGH egyedül-1411 ± 261 oGH + 1D11 H9 1X10-4 5871 ± 1339 oGH + 4B62 D9 3,2X10-4 4323 ± 671 oGH + 2B11 4,2X10-3 3408 ± 642 oGH + 3B11 5,6X10-2 3434 ±719 Sóoldat-557 ± 79 K) példa Növekedés fokozása birkák esetében Két birkából álló csoportokat (átlagsúly 17 kg) különböző mennyiségű oGH elleni antitesttel (2B11, lásd a J) példában) és kontrollként egér globulinnal kezeltünk két egy- 55 mást követő napon át az intraperitonálisan adagolt “SCü-et (146 pg Ci/kg) megelőzően. A négy porcmintát 24 óra elteltével választottuk el és a fentiek szerint vizsgáltuk. A kapott eredményeket a következő 11. táblá- 60 zatban foglaltuk össze. 11
