192918. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorellenes hatású N-6-[(2-amino-2-karbamoil-etil)-amino-metil]-piridin-2-karbonil-3-terc-butoxi-hisztidin-terc-butil-észter előállítására
3 192918 4 A találmány szerinti eljárással (I) képletű N-(6-[(2-amino-2-karbamoil-etil)-amino-metill-piridin-2-karbonil)-3-terc-butoxi-hisztidin-terc-butil-észtert állítunk elő. A találmány szerinti eljárással előállított vegyület daganatellenes hatású. SzámoB különféle vizsgálatot végeztünk, az ismert tumorellenes hatású Bleomycin olyan analógjai előállítására, ahol az aktív hely egy pirimidin-molekula részletet tartalmaz. E kísérletek eredményeképpen jutottunk el az (I) képletű új N-{6-[(2-amino-2-karbamiol-etil)-amino-metil]-piridin-2-karbamoil}-3- -terc-butoxi-hisztidin-terc-butil-észterhez (a továbbiakban a „PYML 4" rövidítéssel jelöljük), amely fémionokkal, például Pe (II)— -ionokkal komplexet képez és figyelemreméltóan erős oxigén-aktiváló képességgel rendelkezik. Ennélfogva az új, találmány szerinti vegyület tumorellenes hatású szerként való használhatóságát feltételezni lehetett. A találmány szerinti (I) képletű vegyületet oly módon állíthatjuk elő, hogy egy (II) általános képletű vegyületből, amelynek képletében bármelyik Y jelentése védőcsoport, az említett védőcsoportokat hagyományos módszerrel eltávolítjuk. Az aminocsoport, illetve iminocsoport védelmére használatos bármely védőcsoport alkalmazható a (II) képletű vegyületben előforduló ilyen csoportok védelmére; a benzil-oxi-karbonil- vagy a terc-butil-oxi-karbonil-csoport, de különösen az o-nitro-fenil-szulfenilcBoport (ezentúl „Npb" rövidítéssel jelezve) előnyösen használható e célra. A védőcsoport eltávolítását végezhetjük katalitikus redukcióval, hirolízis vagy savas közegben történő elbontás segítségével - mindenkor a védőcsoport természetétől függően. Amennyiben védőcsoportként Nps-csoportot alkalmazunk, eltávolítása 0 °C és 60 °C közötti hőmérsékleten, általában szobahőmérsékleten végrehajtott hidrolízissel történhet, amelyhez valamilyen szerves savat, így citromsavat, valamely haloidsavat, így például hidrogón-bromidot vagy sósavat használunk fel, de alkalmazhatunk valamilyen más szervetlen savat, így kénsavat is. A (II) általános képletű vegyületet úgy szintetizálhatjuk, hogy a (III) képletű eritro-3-terc-butoxi-L-hisztidin-terc-butil-észtert (a továbbiakban „BHBE”), vagy annak sóját, egy (IV) képletű 6-{N,N’-kétszeresen védett-[(S)-2-amino-2-karbamoil-etil]-aminometil)-piridin-2-karbonsavval - ahol a (IV) képletben Y jelentése előzők szerinti - illetve e sav valamely reaktív származékával reagáltatjuk. A reaktív savszármazékokra nézve nincs megkötés: bármely a savamidok képzésére szokásosan alkalmazott reakcióképes származék számításba jöhet. Példaként megemlítjük az aktív észterszármazékokat és a savanhídrideket. A reakció termékének elkülönítésére és tisztítására kromatográfiás módszerek alkalmazhatók. A (III) képletű, „BHBE”-nek nevezett vegyületet úgy állíthatjuk elő, hogy az (V) képletű eritro-3-hidroxi-L-hÍ8ztidin (a továbbiakban: HyHis) aminocsoportját először védjük, majd a védőcsoporttal ellátott vegyületet közömbös szerves oldószerben feloldva, inert atmoszférában, zárt csőreaktorban, valamilyen savkatalizátor jelenlétében izobuténnal reagáltatjuk. A (IV) általános képletű vegyületet az alábbi módon állíthatjuk elő: 6-formil-piridin-2-karbonsav-metil-észtert (a továbbiakban: „HPyCME”) (S)-3-amino-2-terc-butoxi-karbonil)-amino-propionsavamiddal (a következőkben: „Boc-DAPA”) reagáltatjuk. A kapott terméket azután a (VI) képletű 6-[(S)-(2-terc-butil-oxi-karbonil-amino-2-karbonil-etil)-amino-metin-piridin-2-karbonsav-metil-észterré redukáljuk (ennek a vegyületnek a jelzése a továbbiakban: „Boc-DAPAy"), és végül ennek iminocsoportját ismert eljárással védve (védőcsoport = Y) kapjuk a (IV) képletű vegyületet. A találmány szerinti eljárással előállított vegyület oxigénaktiváló képességét az alább ismertetett módon határoztuk meg. Az oxigénaktivélóképesség mérésére a spincsapdás módszert alkalmaztuk a következők szerint: 50 mikroliter 4 mmol koncentrációjú vizes PYML 4-oldatot, 50 mikroliter 0,2 mól 8,3 pH-jú trisz-HCI puffert és 60 mikroliter 14 mg/ml koncentrációjú, etanolban oldott terc-butil-oc-fenil-nitront egymással elegyítünk, és az elegyhez 50 mikroliter 4 mmol koncentárciójú vizes FeSOi • 7HaO oldatot öntünk, majd 30 másodperc elteltével 10 mikroliter 45 mmol koncentrációjú vizes nátrium-ditionit-oldatot adunk hozzá. Az elektronspinrezonancia spektrumot (ESR-spektrumot) 3 perccel később szobahőmérsékleten veszszük fel. Ellőnőrző ESR-vizsgálatot végeztünk oly módon, hogy a „PYML 4” jelű találmány szerinti vegyületet kontroliképpen N-{6-[S)-2- -amino-2-karbamoil-etil]-amino-metil]-piridin-2-karbonil}-L-hisztidinnel (jelzése a továbbiakban: „PYML”) helyettesítettük a kísérleti oldatösszetételben. A kapott eredményeket az alábbi I táblázatban összegezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 3
