192842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás affinitás-szorbensek előállítására
9 192812 10-egyszer, végül vízmentes acelonnal kétszer mossuk. A mosáshoz minden esetben a géllel azonos térfogatú mosófolyadékot használunk. Ezután a gólt oly módon rehidratáljuk, hogy csökkenő koncentrációjú (95, 80, 60, 40, 20, 10, 5 térfogati) acetont tartalmazó vizes acetonnal egyszer-egyszer, végül desztillált vízzel kétszer mossuk. A mosáshoz ekkor is a géllel azonos térfogatú mosófolyadékot használunk. Ezután a gélt térfogatának ötszörösét kitevő mennyiségű 0,1 mólos acetát-pufferrel (pH = 4,75) mossuk, amely 0,02% nátrium-nitritet és antioxidánsként 0,1% L-aszkorbinsavat is tartalmaz. A gélt ugyanebben az összetételű pufferoldatban +4 °C-on, fénytől védve tároljuk. A polimer hordozóhoz kötött 3,4-dihidroxi-fenil-szerin mennyiségét UV spektrofotometriás úton, 1 mm-es küvettában, 280 nm hullámhosszon határozzuk meg. A 3,4-dihidroxi-fenil-szerin koncentrációja a hordozón 2,0xl0"3 mól/liter. 2. példa 1,5 millimól (447 mg) BOC-3,4-dihidroxi-fenil-alanint 1 ml, előzetesen nitrogénnel átbuborékoltatott vízmentes dimetil-formamidban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 1,5 millimól (210 pl) vízmentes trietil-araint és 1,0 millimól (195 pl) klórhangyasav-izobutil-észtert adunk hozzá, és 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk az alábbi módon előkészített hordozóhoz: 50 g amino-hexil-agarózt tízszer 200 ml desztillált vízzel mosunk, majd azonos térfogatú dimetil-formamid 5, 10, 20 és 40%-os vizes oldatával egyszer-egyszer mossuk. Ezután a hordozót térfogatával azonos mennyiségű 2:1:2 térfogatarányú dimetil-formamid : acélon : víz eleggyel kétszer mossuk, majd térfogatával azonos mennyiségű ugyanilyen összetételű oldószer-elegyben szuazpendáljuk, és a szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük. A vegyes anhidrid hozzáadása után a szuszpenzió pH-ját 0,01 mólos vizes nátrium-hidroxid oldattal 7,0-7,5-re állítjuk, és 4 órán át 0 °C-on rázzuk. A pH-t óránként ellenőrizzük. 4 óra elteltével a gélt vele azonos térfogatú 2:1:2 térfogatarányú dimetil-formamid : víz : aceton eleggyel ötször, ezután desztillált vízzel ötször mossuk, majd a következőképpen vízmentesítjük: 1 térfogatrész gólt 2-2 térfogatrész, növekvő mennyiségű (5, 10, 20, 40, 60, 80 tórfogat%) acetont tartalmazó vizes acetonnal, majd vízmentes acetonnal, ezután növekvő mennyiségű (5, 10, 20, 40, 60, 80 térfogat%) diklór-roetánt tartalmazó aceton - diklór-metán eleggyel, végül vízmentes diklór-metánnal mosunk. Az oldószert vízsugár-vákuumban leszívatjuk, a gélt vele azonos térfogatú, 0 #C-ra hűtött 1:1 térfogatarányú trifluor-ecetsav : diklór-me-6 tón elegyben szuBzpendóljuk, és n szuszpenziót 2 órán át gyengén rázzuk. 2 óra elteltével a gólt leszűrjük, és vízmentes diklór-metánnal kétszer, csökkenő mennyiségű (95, 80, 60, 40, 20, 10, 5 térfogat%) diklór-metón : aceton eleggyel egyszer-egyszer, végül vízmentes acetonnal kétszer mossuk. A mosáshoz minden esetben a géllel azonos térfogatú mosófolyadékot használunk. Ezután a gélt oly módon rehidraláljuk, hogy csökkenő mennyiségű (95, 80, 60, 40, 20, 10, 5 térfogat%) acetont tartalmazó vizes acetonnal egyszer-egyszer végül desztillált vízzel kétszer mossuk. A mosáshoz ekkor is a géllel azonos térfogatú mosófolyadékot használunk. Ezután a gélt az 1. példában ismertetett összetételű pufferoldattal mossuk, éB ugyanilyen összetételű pufferoldatban tároljuk, az 1. példában megadott körülmények között. A 3,4-dihidroxi-fenil-alanin koncentrációja a hordozón (az 1. példában ismertetett UV spektrofotometriás módszerrel . mérve): 6,7xl0-3 mól/liter. 3. példa 1,5 millimól (480 mg) B0C-D-5-hidroxi-triptofánt 1 -ml, előzetesen nitrogénnel átbuborékoltatott vízmentes dimetil-formamid ban oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, 1,5 millimól (210 pl) vízmentes trietil-amint és 1,2 millimól (156 pl) klórhangyasav-etil-észtert adunk hozzá, és 5-10 percig -10 °C-on keverjük. A képződött vegyes anhidridet elkülönítés nélkül adjuk az alábbi módon előkészített hordozóhoz: 50 g amino-hexil-agarózt tízszer 200 ml desztillált vízzel mosunk, majd azonos térfogatú dimetil-formamid 5, 10, 20 és 40%-os vizes oldatával egyszer-egyszer mossuk. Ezután a hordozót térfogatával azonos mennyiségű 2:1:2 térfogatarányú dimetil-formamid : aceton : víz eleggyel kétszer mossuk, majd térfogatával azonos mennyiségű ugyanilyen összetételű oldószer elegyben szuszpendáljuk, és a szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük. A vegyes anhidrid hozzáadása után a szuBzpenzió pH-ját 0,01 mólos vizes nátrium-hidroxid oldattal 7,0-7,5-re állítjuk, és 4 órán át 0 °C-on rázzuk. A pH-t óránként ellenőrizzük. 4 óra elteltével a gélt vele azonos térfogatú 2:1:2 térfogatarányú diinetil-formamid : víz : aceton eleggyel ötször, ezután desztillált vízzel ötször mossuk, majd a következőképpen vízmenlesítjük: 1 térfogatrész gélt 2-2 térfogatrész, növekvő mennyiségű (5, 10, 20, 40, 60, 80 térfogat%) acetont tartalmazó vizes acetonnal, majd vízmentes acetonnal, ezután növekvő mennyiségű (5, 10, 20, 40, 60, 80 térfogati) diklór-metánt tartalmazó aceton - diklór-metán eleggyel, végül vízmentes diklór-metánnal mosunk. Az oldószert vízsugár-vákuumban leszívatjuk, a gélt vele azonos térfogatú, 0 °C-ra hűtött 1:1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
