192771. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfolipid és szfingolipid-amidok és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
19 192771 20 3 g szfingozint (amelyet marha-agyvelőből kapott szfingolipidekből nyertünk ki; az így kapott szfingozin 18 szénatomos) és 2 g diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. Az elegye! tovább melegítjük és a képződött csa- 5 padékot 1 óra hosszat leválni hagyjuk, majd a csapadékos elegyet szobahőmérsékletre hűtjük és 25 ml etanolt adunk hozzá. A szerves oldószeres oldatot 5 mólos ammónium-hidroxid-oldattal mossuk, majd vákuum- to ban szárazra pároljuk és a maradékot 30 ml metanolban oldjuk. A metanolos oldatot 0 °C- ra hütjük, amikoris a diciklohexil-karbamid kiválik; a szuszpenziót leszűrjük és a szűrletből az oldószert vákuumban elpárologtat- 15 juk. A maradékot 35 ml acetonban melegítés közben oldjuk, majd az oldatot lehűtjük, amikoris a kapott 2-bróm-dihidrolizergil-szfingozin-amid kikristályosodik; op.: 179 °C, hozam: 4.1 g. 20 A termék vékonyréteg-kromatográfiai vizsgálata (szilikagélen, eluálószerként etil-acetát és metanol 80:20 térfogatarányú elegyét alkalmazva) azt mutatja, hogy a termék egyetlen vegyületből álló egységes anyag; 25 Rf = 0,35. Optikai forgatóképesség (2 %-os metanolos oldatban, 10 cm-es polarimetriás csőben mérve): [cc]d = -63 °. Elemzési adatok: a C34Hs2N303Br képlet alapján 30 számított értékek: C 64,82%, H 8,12%, N 6,70%; talált értékek: C 64,75%, H 8,31%, N 6,66%. FARMAKOLÓGIAI TULAJDONSÁGOK 35 Az 1., 2., 3., 15. és 16. példában leirt vegyületek farmakológiai aktivitását teszteltük. A szóban forgó vegyületeket egyaránt vizsgáltuk in vitro és kísérleti állatokon in vivo; bebizonyosodott, hogy ezek közvetlenül a központi idegrendszerre hatnak. Gamma-amino-butiril-szfingozin-amid (az 1. példa szerinti 1 képletű vegyület) a.) In vitro végzett kísérletek Az NH2(CIl2)3-C02H képletű gamma-araino-vajsav (GABA) endogén anyag, amely egy specifikus receptorral való interakciója révén biológiai aktivitással rendelkezik, de önmagéban nem képes az agyi gáton áthatolni. Ennek megfelelően a GABA-t in vitro aktívnak, in vivo azonban meglehetősen inaktívnak találták. Ezzel szemben a jelen találmány szerinti vegyületek in vitro és in vivo egyaránt aktivak. A jelen találmány szerinti vegyületek in vitro aktivitáséinak kimutatása céljából rádióaktív gamma-amino-vajsav (3H-GABá) patkányok agykérgének szimpatikus membránjához való kötődési szintjét mértük. Ezt a meghatározást Enna és Snyder módszerével végeztük [lásd: Enna, S. J. és Snyder S. H.: Mol. Pharmacol. 13, 442-453 (1977)]. Ezen tesztek eredményeit az I. Táblázat tartalmazza, a megkötött aktív anyag százalékábar van kifejezve. így hasonlítjuk össze az 1 képletű vegyület in vitro aktivitását az egyes komponensek aktivitásával. Az eredmények azt mutatják, hogy a szfingozin egymagában nem rendelkezik biológiai aktivitással, míg a GABA egymagában az 1 képletű vegyülethez hasonló méretű aktivitást mutat. I. TÁBLÁZAT 1 képletű vegyület Kötődés a patkány agykérgének membránjához Vizsgálati anyag Kötődés, % 3H-GABA 2.10-8 M 100 3H-GABA 2.10-8 M + GABA 10-8 M 90 + GABA 10-7 M 45 + GABA IO-6 M 25 + GABA IO-5 M 20 + GABA 10-4 M 20 3H-GABA 2.10-8 m + szfingozin IO-8 M 100 + szfingozin 10'7 M 100 + szfingozin 10~6 M ' 100 + szfingozin 10-5 M 100 + szfingozin IO'4 M 100 3H-GABA 2.10-8 M + 1 sz. termék 10*8 M 95 + 1 sz. termék 10~7 M 60 + 1 sz. termék 10"6 M 40 + 1 sz. termék 10'5 M 25 + 1 sz. termék 10*4 M 20 11
