192752. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiolóiai úton
3 192752 4 A találmány tárgya új eljárás sziszoraiein antibiotikum és gyógyászatiéig elfogadható sói előállítására. A sziszomicin a gentamicin-C-hez hasonló szólesspektrumú antibiotikum. Gátolja a Grain-pozitív és a Gram-negal ív baktériumok szaporodását. Gyógyászati alkalmazási területe a sebészeti, légúti, emésztőrendszeri, kiemelten a húgyúti és vesefertőzések, valamint az égési sérülések kezelése. A sziszomicin előállítására több mikrobiológiai eljárás ismert. így például a 160 408 és 160 698 számú magyar szabadalmi leírások szerint a sziszomicint a Micromonospora inyoensis (NRRL 3292) nevű mikroorganizmus törzs főkomponensként. termeli. A Micromonospora grisea (NRR1, 3800) nevű mikroorganizmus törzs verdamicin mellett (167 528 számű magyar szabadalmi leírás), a Micromonospora zyonensis (NRRL 5466) a G-52 jelű antibiotikum mellett (3 965 068 szánná amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), a Micromonospora purpurea var nigrescens (MNG 00122) pedig gentamicin komplex mellett bioszintetizálja a sziszomicint (168 778 számú magyar szabadalmi leírás). A 179.146 számú magyar szabadalmi leírás szerint a Micromonospora í'osea (MNG 00182), a 179.145 számú magyar szabadalmi leírás szerint a Micromonospora danubiensis (MNG 00171) mikroorganizmus törzs fő komponensként termeli a sziszomicint. A találmány célja olyan új mikroorganizmus biztosítása a fermentációs ipar számára, melynek felhasználásával a sziszomicint nagy koncentrációban, rövidebb fermentációs idő alatt, jó termeléssel lehet előállítani. Kutatómunkánk során magyarországi vízmintákból egy új, sziszomicin antibiotikumot termelő mikroorganizmust izoláltunk. Ez a törzs eltérőnek bizonyult valamennyi eddig ismeretes mikroorganizmustól. Ezért, ezt a törzset új fajnak, Micromonospora purpureonigra-nak neveztük el. E mikroorganizmus tenyészetét a termelőképesség növelése céljából többszöri szelekciónak és mutagén kezelésnek veteti uk alá. Az ily módon elei t legjobb izolálom tei-melökéjjessége 100-151) E/ml volt. 5 A termelőképesség további növelését a 4 294 927 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett, fajon-beiüli protopiaszt-fúzióval végeztük. A fúzió és regenerálás után kapott egyedek kózótt ta- 10 láltunk egy, a rekombinációs partnerek ternit lőképességét. lényegesen meghaladó törzset. E törzset Micromonospora purpureonigra IM-9-nek neveztük el és a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében (MNG 00225) 15 számon letétbe helyeztük. A találmány azon a felismerésen alapul, hogy az eddig nem ismert Micromonospora purpureonigra faj 1M-9 jelzésű törzse (MNG 00225) fermentációja során sziszomicinre 20 nézve igen nagy koncentrációjú fermentieret kapunk, amely minor komponensként egy ez ideig ismeretlen szerkezetű, butanollal extrahálható, Gram-pozitiv mikroorganizmusokra (Staphylococcus aureus 1110, Staphylococcus 25 aureus epidermidis, Streptococcus faecalis) ható antibiotikumot is tartalmaz. A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás sziszomicin antibiotikum és gyógyászatilag elfogadható sóinak az előállítására aerob 30 fermentációval asszimilálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon és kívánt esetben azt követő sóképzéssel, amely abban áll, hogy a fermentációt úgy hajtjuk végre, hogy az új Micromono- 35 spóra purpureonigra sugárgomba faj valamely, sziszomicin antibiotikum termelésére képes törzsét., előnyösen a Micromonospora purpureonigra IM-9 jelzésű t.örzset (MNG 00225) asszimilálható nitrogén - és szenior- 40 fásokat, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon, aerob körülmények között tenyésztjük, majd a keletkezett sziszomicint a fermentiéből elkülönítjük, tisztítjuk. A találmány szerinti eljárásban alkalma- 45 Z(,tt Micromonospora purpureonigra TM-9 jelű m kroorganizmust az alábbiakban írjuk le: 1. táblázat A Micromonospora purpureonigra spec. nov. IM-9 jelzésű (holotípus) törzs kulturális-morfológiai leírása Táptalaj Telepszín és morfológia Tenyészközeg Keményítő-pepton agar Légmicélium nincs. Fejlett, gyűrt vöröses-lila telepek. Vöröses-lila oldódó pigment diffundál. Burgonya-glükóz agar Fejlett, gyűrt lila szubsztrátmicélium. Sporulálva folyamatosan sötétedik és feketébe vált át. I.ilás-sárga oldódó pigment diffundál. Czapek-szacharóz agar Rendkívül gyenge, jellegtelen növekedés 3
