192741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új neplanocin antibiotikumok előállítására
17 192741 18 A 80 g nyers terméket oszlopba töltött és 10 : 1 : 1 arányú n-propanol-tömény ammónia-viz eleggyel nedvesített 6 liter kovasavgélre visszük fel, majd ugyanilyen ol'dószerkeverékkel eluálunk. Minden egyes 600 g eluátumot frakcionálunk, és a 20-37. számú frakciókban találjuk a neplanocin D-t. Ezeket a frakciókat elegyítjük, vákuumban 30 ml-re bepároljuk, és a maradékot hűtés közben állni hagyjuk. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva, 460 mg nyers, kristályos neplanocin D-t kapunk. A nyers termékként kapott 460 mg kristályokat 3 ml forró vízben oldjuk, és 1850 ml Sephadex G-15-tel töltött és vízzel nedvesített oszlopra visszük fel, majd vízzel eluáljuk. Mindegyik 100 ml-es eluátumot frakcionáljuk, a 15. és 16. számú frakciókat egyesítjük, és a 200 ml oldatot 20 ml-re pároljuk be. A bepárlási maradékot szobahőmérsékleten állni hagyva, fehér tűkristályok alakjában 314 mg neplanocin D vélik ki. 5. példa Az 1, példa szerinti eljárásban kapott és neplanocin B-ként számított 50 mcg/ml hatékonyságú, 140 liter szüredéket hidrogén alakban levő Amberlite IR-120 kationcserélő gyantát tartalmazó 20 literes oszlopra viszszük fel, hogy az anyagot adszorbeáljuk, majd 100 liter vízzel mossuk. Az eluálast 3,7 n vizes ammóniaoldattal hajtjuk végre, és az első 30 liter eluátumot kiöntjük. A következő 90 liter eluátumot egyesítjük, pH-ját 6 n sósavval 8-ra állítjuk be, majd aktívszenet tartalmazd 4 literes oszlopra visszük fel, vízzel mossuk, és 90 liter, 70%-os metanollal eluáljuk. Az így kapott eluátumot 500 ml-ye bepárolva, alacsony hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált terméket elválasztva és szárítva, 5,1 g nyers neplanocin B-t kapunk. Tisztasága 60%. Kitermelés 44%. 6. példa Az 5. példában kapott 5,1 g neplanocin B-t 8,3 x 40 cm méretű, 2 liter kovasavgéjt tartalmazó és 10 : 0,5 arányú aceton-viz eleggyel nedvesített oszlopra visszük fel. 80 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyiket frakcionáljuk. A 16-24. számú frakciókat egyesítjük. Çzeket az aktív anyagot tartalmazó frakciókat alacsony hőmérsékleten állni hagyva, 2,57 g neplanocin B fehér lemezes kristályokként válik ki. Kitermeléés 32,8%. 7. példa A mikroorganizmus tenyésztését az 1. példa szerint végezve, körülbelül 200 liter fermentlevet kapunk. A sejttömeget szűréssel 10 elválasztjuk, vízzel mossuk, és a szüredéket és a mosóvizet egyesítjük. így 140 liter, 1,5 mcg/ml hatékonyságú oldatot kapunk. Ezt az oldatot 20 liter hidrogénalakban levő Amberlite ÍR-120 kationcserélő gyanta oszlopon vezetjük át, és 100 liter vízzel mossuk, 3,7 n vizes ammóniaoldattal eluálunk, és az első 30 liter eluátumot kióntjük. Az ezutáni 90 liter eluátumot egyesitjük, pll-jat 6 n sósavval 8-ra állítjuk be, majd aktívszenet tartalmazó 4 literes oszlopra töltjük, vízzel mossuk, és 90 liter 70%-os vizes metanololdattal eluáljuk. Az így kapott eluátumot 500 ml-re bepárolva és a maradékot fagyasztva szárítva, 31,2 g nyers neplanocin F-et kapunk. Tisztasága 0,5%. 8. példa A 7. példa szerint előállított 31,2 g nyers neplanocin F port 10 : 0,2 : 1 arányú n-butanol-28%-os vizes ammónia-oldat-víz eleggyel nedvesített 800 ml kovasavgélt tartalmazó oszlopra visszük fel, és ugyanezzel az oldószerkeverékkel eluálunk. 150 ml-es frakciókat szedünk, ezeket egyenként frakcionáljuk, és az 5-10. számú frakciókat egyesítjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékként kapott sűrítményt olyan kovasavgélt tartalmazó 240 ml-es oszlopra visszük fel, amely kovasavgélt előzetesen 10 : 2 : 0,2 arányú kloroform-metanol-ecetsav oldószerkeverékkel nedvesítünk, és az eluálást ugyanilyen összetételű oldószereleggyel végezzük. 20 ml-es frakciókat szedünk, mindegyiket frakcionáljuk, és a 67-120. számú frakciókat egyesítjük. Ezeket az egyesített frakciókat bepárolva és a maradékot szárítva, 108 mg kristályos, nyers neplanocin F-et kapunk. Kitermelés 51%. 9. példa A 8. példa eljárása szerint kapott 198 mg kristályos nyers neplanocin F-et vízzel nedvesített 186 ml Sephadex G-15 oszlopra visszük fel, és vízzel eluáljuk. 10 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyik eluátumot frakcionáljuk. A 22-27. számú frakciókat egyesítve, 5 ml-re bepároljuk. Az így kapott bepárlási maradékot hűtőkamrában állni hagyjuk, hogy a neplanocin F fehér tűkristáíyok alakjában kiváljon. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva és szárítva, 87 mg kristályos neplanocin F-et kapunk, kitermelés 41%. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletü neplanocin-antibiotikumok és fiziológiailag elfogadható sóik előállítására - ebben a képlet-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
