192732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aktív mikrobák tömeges előállítására
3 192 732 4 Szilárd és folyékony természetes anyagokat egyaránt használhatunk. Ezeket vízben oldjuk, illetve szuszpendáljuk, és e művelet előtt, aközben vagy azután besugározzuk az említett dózisú ionizáló sugárzással. Az ionizáló sugárzást radioaktív vagy röntgensugarakkal biztosítjuk. Célszerűen kemény béta-sugarakat használunk, például a Co60 izotóp sugarait. Adott esetben végezhetjük a besugárzást elektrongyorsitóból származó ionizáló sugarakkal is. Amennyiben szilárd természetes anyagot használunk a tápközeg készítéséhez, előnyös lehet ezt 10- —800 mikrométer, előnyösen 20—100 mikrométer szemcseméret eléréséig aprítani. Ily módon egyrészt megkönnyíthetjük a makromolekulák lebontását, másrészt elegendően nagy felületet biztosíthatunk a fermentáció számára. Az aprítást célszerűen dezaggregátorban hajtjuk végre, mely alkalmas egyúttal a kiindulási anyag szuszpendálására is. A tápközeget kívánt esetben kiegészíthetjük a szokásos ásványi anyagokkal, biosz anyagokkal és más, a fermentáláshoz szükséges adalékokkal. Ha olyan mikrobákat szaporítunk, amelyek szűrt fermentlevet igényelnek, az így elkészített tápoldatot szűrjük. A tápközeget beoltjuk a mikroba tenyészetével, és 105—108 sejt/cm1 * 3 sejtkoncentrációval indítjuk a fermentációt. A mikrobákat szaporíthatjuk szakaszos vagy folytonos eljárással, a mikrobák természete szerint aerob vagy anaerob körülmények között. A találmány szerinti eljárással igen nagy teljesítménnyel szaporíthatunk különféle nagy tápigényű ipari rendeltetésű mikroba törzseket. Eddigi tapasztalataink szerint jó eredmények érhetők el például a Lactobacillus plantarum, a Pcdiococcus cerevisiae, a Trichoderma viridae és a Saccharomyces cerevisiae szaporításában. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy lehetővé teszi ipari célú mikrobák tömeges előállítását természetes anyagokból készített tápközegben. A találmány szerinti eljárás az ionizáló sugárzás alkalmazása folytán azzal a további előnnyel rendelkezik, hogy biztosítja egyúttal a felhasznált természetes anyagok sterilezését. Így részben vagy teljesen megtakaríthatjuk a tápanyagok sterilezéséhez szükséges energiát. Ez a lehetőség megkönnyíti ezenkívül a folytonos fermentáció alkalmazását a mikrobák szaporításánál. A találmány szerinti eljárással előállított mikróbatömeg megfelel az egészségügyi és higiéniai előírásoknak. A találmányt az alábbi példákkal világítjuk meg közelebbről az oltalmi kör korlátozása nélkül. 1. példa Pediococcus cerevisiae szaporítása 5 kGy sugárdózissal kezelt BL 55 búzalisztet 50 °C-on hőkezelünk 30 percig, majd DEZ 2 T dezintegrátoron kilencszeres mennyiségű vizzel 20 mikrométer szemcsenagyságú szuszpenziót készítünk belőle. Az így kapott szuszpenzióhoz 1 000 cm3-énként az alábbi adalékokat adjuk steril törzsoldatokból: 0,23 g nátrium-acetát 0,136 g kálium-dihidrogénfoszfát 0. 005gMns04 -2H20 A 7,0-7,2 pH-jú tápoldatot beoltjuk Pediococcus cerevisiae tenyészetével. Az induló csíraszám 106/cm3. Az aerob fermentációt 48 órán át folytatjuk 30 °C-on. Ekkor 4 • 109/cm3 élőcsíraszámú mikróbaszuszpenziót kapunk, amelyet fermentált kolbász előállítására használunk. 2. példa Lactobacillus plantarum szaporítása 6 kGy sugárdózissal kezelt VH BL 97 % liszt 80 g-ját és 2,6 kGy sugárdózissal kezelt húsliszt 5 g-ját összekeverjük steril ivóvíz minőségű vízzel, és 1 000 cm3 szusz penziót készítünk belőle. A pH-t 7,0-7,2-re állítjuk be. A tápanyagszuszpenziót 15 percig hőkezeljük 55 °C-on. Ezután a tápanyagot beoltjuk Lactobacillus plantarum tiszta tenyészetével. Az induló csíraszám 106/ /cm3. Az anaerob fermentációt 30 °C-on 36 órán át folytatjuk. Ekkor 8 • 109/cm3 élőcsíraszámú baktériumszuszpenziót kapunk, amelyet fermentált kolbász előállítására használunk. 3. példa Pediococcus cerevisiaet szaporítunk az 1. példában leírtak szerint azzal a különbséggel, hogy 900 cm3 liszt-víz szuszpenzióhoz 100 cm3 4 kGy sugárdózissal kezelt tejsavót adunk, és az így előállított elegyet egészítjük ki a felsorolt tápsókkal. A tápoldatot beoltjuk Pediococcus cerevisiae tiszta tenyészetével. Az induló csíraszám 2 • 106/cm3. Az aerob fermentációt 30 °C-on 48 órán át folytatjuk, mire az élőcsíraszám 6 • 109/cm3 értéket ér el. A kapott baktériumszuszpenziót fermentált kolbász előállítására használjuk. 4. példa Trichoderma viridae szaporítása 8 kGy sugárdózissal kezelt fűrészpor 50 g-ját és 4 kGy sugárdózissal kezelt halliszt 20 g-ját összekeverjük 0,1 g Mns04-tal, 0,02 g FeClj • 6 H20-tal és 0,02 g etiléndiaminteíraecetsawal (EDTA), valamint steril ivóvíz minőségű vízzel, és 1 000 cm3 térfogatú, 5,8 pH értékű szuszpenziót készítünk belőle. A szervetlen sókat steril törzsoldatokból adagoljuk. A kapott szuszpenzió szilárd részecskéinek szemcsenagyságát DEZ 2 T dezintegrátorral 100 mikrométerre állítjuk be, majd a tápoldatot 30 percig kezeljük 50 °C hőmérsékleten. A tápoldatot 35 °C-ra hűtjük le, és beoltjuk Trichoderma viridae tiszta tenyészetével. Az induló csíraszám 106/cm3. Az aerob fermentációt 35 °C-on 48 órán át végezzük. Ennek elteltével a fermentlében a cellulóz bontási foka 82 %. A kapott mikróbaszuszpenziót cellulóz bontására használjuk fel. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás aktív mikrobák tömeges előállítására, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
