192642. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nukleinsavak és purinbázisok kivonására zselatinból
1 2 192 642 Az adatokból kitűnik, hogy a ciklodextrin-polimer a zselatinoldatból is jobb hatásfokkal távolítja el a gátlóanyagokat, mint a dextrán alapú. 3. példa Vízköpennyel ellátott, ultratermosztáttal 55 °C-on tartott, 30 cm magas, 3 cm átmérőjű ciklodextringyöngypolimer oszlopba (részecskeméret 90—300 #jm, ciklodextrintartalom 57,2% poli (vinil-alkohol)tartalom 0,4%) 30 g szárazanyagot tartalmazó, nátriumacetát/ecetsav pufferben (pH = 3,4) előduz- 10 zasztott (3-ciklodextrin-gyöngypolimert töltünk. Az eredményeket a 4. táblázat mutatja be. Az oszlopon átáramoltatjuk a kezelendő zselatin oldatát. (Ez úgy készül, hogy 100 ml nátrium-acetát/ ecetsav pufferben (pH = 3,4) feloldunk 2,5 mgDNS-t és 5 g (A példa), 2 g (B példa) illetve 15 g (C példa) ^ gátlóanyagot nem tartalmazó, inert zselatint). Ezután a töltetet 500 ml KH2P04 (NaOH-pufferrel (pH = 10,5) eluáljuk, amely 0,2 mol/liter NaCl-ot tartalmaz (átfolyási sebesség 100 ml/óra). A vizsgálatot úgy is elvégezzük, hogy DNS helyett 1,5 mg adenint mérünk be, majd pedig úgy, hogy ciklodextrin polimer helyett Molselect-et használunk mindkét gátlóanyaggal. 4. táblázat A példa jele Gátlóanyag Ciklodextrin Gátlóanyagtartalom, mg Molselect B K K B B K K B A DNS 2,50 2,35 0,94 2,50 1,00 0,40 A AD 1,50 1,46 0,97 1,50 0,96 0.64 B DNS 2,50 2,40 0,96 AD 1,50 1,46 0,97 C DNS 2,50 2,31 0,93 AD 1,50 1,42 0,95 Megjegyzés:B = bevitt anyag, K = kivonat Látható, hogy a ciklodextrin polimer oszloptöltetként is hatásosabban működik a dextrán alapúnál. 4. példa Vízköpennyel ellátott, ultratermosztáttal 45 °C hőmérsékleten tartott, 300 ml térfogatú edénybe bemérünk 20 g szárazanyagot tartalmazó, nátriumacetát-ecetsav pufferben (pH = 3,4) előduzzasztott ß-ciklodextrin gyöngypolimert (részecskeméret d = 90-300 fim, ciklodextrintartalom 56 tömeg%, poli (vinil-alkohol)-tartalom 0,4 tömeg%), majd hozzáöntjük 100 ml kezelendő zselatin 45 °C hőmérsékletű 10 tömeg%-os oldatát, s az elegyet 3 órán át keverjük. Zselatinként a Nemzetközi Zselatin Munkabizottság (IAG) DGF 66481 sz. mintáját alkalmazzuk, amely 920 ppm DNS-t és 131 ppm adenint tartalmaz (A). A vizsgálatot úgy is elvégezzük, hogy 100 ml 5 4Q tömeg%-os zselatin-oldatot használunk s az elegyet 2,5 óráig keverjük (B), ill. 100 ml 2 töme^f-os oldatot alkalmazunk, s a keverést 2 órán át folytatjuk (C). Az elegyből mindhárom esetben szűréssel eltávo- 45 lítjuk a polimer részecskéket, s azokat az I. példában említett módon eluáljuk. Az eredményeket az 5. táblázat szemlélteti. ,5. táblázat Poli-Gátlóanyagtartalom, ppm Kezelés Minmer/ kezelés előtt Összesen, után, A kivonás ta zsela-DNS Adeadenin mértéke% tin egyenéregyenértömegarány nin tékben tékben (A) 2 920 131 223 211 94,6 (B) 4 920 131 223 214 96 (C) 10 920 131 223 218 98 4
