192617. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különleges tisztaságú hialuronsav előállítására
1 192 617 2 A VI. táblázatban szereplő mikrobiológiai eredetű HA készítményt az előzőekben ismertetett 1—4. fermentációkból nyertük. Megjegyzésre érdemes, hogy ez a készítmény az ízületekbe való injektálásra csak nitrocellulózon történt szűrés után alkalmas anélkül 5 nem. Másrészt viszont a technika állása szerinti 1. ismert készítmény (lásd az 5. ábrát) nitrocellulózon való szűrést követően is némiképpen meghaladja az elfogadhatóság határát. Nyilvánvalóan az 1. ismert készítményben a reakcióképes fehérjék mennyisége 10 túl nagy ahhoz, hogy a féhéijét kötő szűrési műveletettel eltávolítható lenne. VI. Táblázat Hialuronsav készítmények értékelése lóízületben adott reaktivitás vizsgálatával Készítmény ízületek Átlagos A készítmény 20 száma Cl. elfogadhatósága Nitro-cellulózon átszűrt mik-14 4,6 Megfelelő 25 robiológiai eredetű készítmény 13 5,5 Megfelelő Nem szűrt mikrobioló-11 16,4 Nem megfelelő 30 giai eredetű készítmény 6 17,4 Nem megfelelő 1. ismert termék, tisztított és szűrt készítmény 10 6,2 Nem megfelelő 35 40 Azonos klinikai index használható HA-nak beteg ízületek kezelésére való hatásosságának kiértékelésénél. Ennek vizsgálatára szolgáló rendszerben az ízület 45 klinikai tüneteit az ízületbe adott komplett vagy inkomplett Freund adjuvánssal váltjuk ki. Ez az adjuváns az ízületeken először akut, majd krónikus tüneteket idéz elő, melyekre az ízület nagymértékű mozgásgátoltsága és duzzadása jellemző, és a tü- 50 netek két hónapon belül nem múlnak el. Bakteriális eredetű HA készítmények hatásosságát fenti módon kezelt ízületeken vizsgáltuk. A kísérletekben az adjuvánssal kórossá tett ízületekből ízületi nedvet távolítunk el és ezt bakteriális 55 eredetű HA készítménnyel helyettesítettük. A vizsgálat mind akut állapotban, mind krónikus állapotban lévő ízületeken elvégeztük. Előbbi esetben a Freund ajduváns beadását követő 3 napon belül, utóbbi esetben 12—34 napon belül injektáljuk be 60 a HA készítményt. A klinikai index értékelését az adjuváns beinjektálásának napján kezdjük és a HA beadása után 4 napig folytatjuk, majd három héten át hetenként egyszer végezzük a megfigyeléseket. A 8. és 9. ábrákon láthatók a 30 napos vizsgálat eredményei. 65 A 8. ábrán az akut állapotra vonatkozó eredmények láthatók. A „0” napon tett leolvasásokat úgy helyezzük el a relatív index skálán, hogy az összehasonlítás megtételéhez jól áttekinthető legyen. A „0” nap a Freund adjuváns beadását követő 3. napot jelenti az akut ízületben. A 8. ábrán a klinikai index első 30 nap során bekövetkező változása látható az 1. és 2. fermentációkból származó, valamint a technika állása szerinti 1. tisztított HA készítmény alkalmazása esetén. Az eredményeket ugyancsak az adjuvánssal beinjektált, de HA-val nem kezelt ízületek klinikai indexeihez — ez utóbbiakat kortroll-ként tekintve — hasonlítottuk. Említésre érdemes, hogy a kontroll lovak állapota a Freund adjuváns beadásától számított 4 napon át folyamatosan romlott, ezután minden kezelés nélkül némiképpen javul. E javulás révén az ízület állapota azonban nem éri el a harmadik napra sem a kiindulási szintet és a 4. napon az állapot platót ér el. Ez a krónikus patológiás állapot kialakulásának tipikus képe. Az akut szimptómákban jelentős javulást észlelünk a HA beinjektálását követően. A 9. ábrán a krónikus állapotot mutatjuk be. A HA beinjektálást 12—34 nappal megelőzően komplett vagy inkomplett Reund adjuvánssal kezelt lovak önmaguk kontrolljaként tekinthetők, mivel a „0” napot, azaz a HA beadást megelőzően már legalább hét napon át stabil volt az állapotuk. A kontrollvonal ezt a kontroll index szintet jelenti. A HA-val történő kezelést követően azonnal javulás következik be a klinikai állapotban. A lovak hosszabb távú megfigyelése azt jelzi, hogy az állapot javulása plató felé tart. Ezért úgy véljük, egynél többszöri HA kezelésre van szükség. A vizsgálatba vont lovak közül egynek az ízületi betegsége ismeretlen kórokú. Mint a 10. ábrán látható két bakteriális eredetű HA injekciót adtunk be ennek a lónak az ízületébe 30 napos időkülönbséggel. Ebben az esetben a „0” napi leolvasott értékeket 10-nek tekintjük, hogy a kezelés hatására bekövetkező változást ábrázolni tudjuk. Mind az első, mind a második HA injekció beadása után a javulást valamelyes visszaesés követte, amit csak a duzzadás jelzett. A második injekció beadása után az ízület duzzadása elmúlt, és a kezelést követően három hónapon belül sem jelent meg újra. Az ismertetett adatokból nyilvánvalóan látható, hogy a különlegesen tiszta bakteriális eredetű HA lóízületekben nem reaktív és hatásos kóros ízületek mozgásgátoltságának és/vagy duzzadtságának kezelésére. Mivel a találmány szerint előállított bakteriális eredetű HA tisztább minden kereskedelmi forgalomban beszerezhető készítménynél, beleértve a szemészeti kezelésekhez használatosakat is, igen valószínű, hogy a találmány szerinti előállított HA készítmények sebészeti beavatkozások esetén a szem csarnokvizének helyettesítésére is alkalmazhatók lennének. A találmány szerinti készítmények minden felhasználási területen helyettesíthetnék a kakastaréjból, illetve a köldökzsinórból nyert HA készítményeket. Fentiek ismeretében, úgy véljük, a HA előállítása és alkalmazása szakember számára számos különböző módon válik lehetővé. Ennek megfelelően fenti példák csak a találmány bemutatását szolgálják, nem korlátozó jellegűek. 8
