192549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szaponinmentes fehérjekoncentrátum előállítására lucernából
5 192 549 7 Optimális növekedés: Sabouraud-glükóz-agaron, pH: 5,6, 28 °C. Festődés: a lég és szubsztrát micélium laktofenol-gyapotkékkel jól festődik. Fentiek alapján a törzs a Fenicillium genuszba biztonsággal, a notatum fajcsoportba közepes valószinűséggel sorolható. A Penicillium sp. GATE GX — 5 törzsből szubmerz tenyésztéssel inokulumot készítünk 1,0 — 20,0 tömeg/ térf.% vízoldható szénhidrátot előnyösen 3,0 tömeg/ térf.% szacharózt, 0,1-0,5 tömeg/térf.% szervetlen nitrogénforrást, előnyösen 0,2 tömeg/térf.% ammónium-nitrátot, 0,2 —2,0 töincg/térf.% szerves bioszanyagot, előnyösen 0,2 tömcg/térf.% malátakivonatot, és/vagy húskivonatot, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajon. pH: 4,0-8,0, előnyösen 6,0, tenyésztési hőmérséklet: 20 — 37 °C, előnyösen 28 °C, fermentációs idő 48 - 96 óra, előnyösen 72 óra. 5 — 20 tf/tf.% előnyösen 10 tf/lf.% inokulummal beoltjuk a szaponintartalmú lucernaprésléből vagy hígított lucernaprésléből, 1,0—10,0 tömeg/tf-% vízoldható szénhidrátot, előnyösen 6,0 t% melaszt, 0,2-0,3 % bioszanyagforrást, előnyösen 0,2 t% kukoricalekvárt, 0,1—0,5% szervetlen nitrogénforrást, előnyösen 0,2 % ammónium-nitrátot és/vagy ammónium-foszfátot, valamint szervetlen sókat tartalmazó táptalajt. pH; 4,0- 8,0, előnyösen 6,0; tenyésztési hőmérséklet: 20 — 35 °C, előnyösen 28 °C; fermentációs idő: 48 — 96 óra, előnyösen 78 óra, amíg a szaponintartalom 0,5 — 1,0 mg/ml szintről 0,01 mg/ml szintre csökken. A fermentlevet 70—100 °C-on, előnyösen 90 °C-on hőkezeljük, az így kicsapott biomasszát szűréssel elválasztjuk, bepárlással töményítjiik, ismert módon megszántjuk. Az 50-55 % fehérjetartalmú végterméket fehérjeforrásként használjuk takarmányokban, előnyösen az együregű gyomrúak takarmányaiban a fehérjekomponens, előnyösen a szója helyettesítésére. Eljárhatunk úgy is, hogy a sűrített fermentlevet használjuk fehérjeforrásként nedves takarmányozási technológiákban. A préslé és a sűrítmény szükség szerint konzerválható a felhasználásig oly módon, hogy a pH-t 2,0-4,0, előnyösen 3,5 értékre állítjuk be ásványi és/vagy szerves savval, előnyösen hangyasavval. Különös előnye a találmánynak, hogy az eljárásunk szerint előállított szaponinmentes, magas fehérjetartalmú termék alkalmas a szója teljes értékű helyettesítésére az együregű gyomrúak takarmányaiban, 10—50 % mennyiségben. További előny, hogy az eljárásban keletkező ikertermék, a rostos présmaradék szintén értékes takarmány és/vagy takarmányadalék, amely használható frissen, présnedvesen vagy ismert módon megszárítva, kérődzők és együregű gyomrúak takarmányozásában. Figyelemre méltó előny, hogy az eljárással szaponin-mentesíthetők a magas szaponintartalmú (5-13 g/kg) köztermesztésben levő lucernafajtákból készült szárílmányok, lisztek, sűrítmények is. Találmányunk értelmében úgy járunk el, hogy lucerna-fitomasszát állítunk elő szántóföldi termesztéssel, ismert lucernafajtákkal, előnyösen alacsonyabb szaponintartalomra (1—5 g/kg) szelektált fajtával. A zöld lucernát szecskázzuk, a szecskát dezintegráljuk, majd kipréseljük. A préslevet a Streptomyces sp. GATE-38 (MNG 00282) vagy Penicillium Sp. GATE GX - 5 (MNG 00342), vagy Candida utilis GATE 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 G- 1 (MNG 00341) törzsekkel fermentáljuk 0-0,1 mg/ml, hemolízissel mért szaponintartalomig. A fermentált préslevet ismert módon sűrítjük, szükség szerint konzerváljuk, vagy megszárítjuk. Az így nyert termékeket a fajta és a tartástechnológiák által meghatározott mennyiségben fehérjekiegészítésre, előnyösen a szója helyettesítésére használjuk 10-50 %ban. Az említett mikroorganizmusok törzsfenntartása megoldható bármilyen ismert módszerrel, például liofilizálással, spórás állapotban steril parafíinolaj alá zárással, gabonafélék sterilczctt magjain való spóráztatással. Az inokulum készítést előnyösen 2,0— 2,51% agar-agarral szilárdított, 0,5— 1,5 tömeg/tf.% vízoldható szénforrást tartalmazó, szaponintartalmú lucernapréslé táptalajon passzált és fenntartott tenyészetekkel végezhetjük. Az. így fenntartott szubkultúrákban biztonságosan a szaponin tűrő és bontó vonalak maradnak fenn. A találmányunk szerinti eljárás részletes bemutatására az alábbi példákat adjuk meg. /. példa A Streptomyces sp. GATE — 38 (MNG 00282) törzset szaponintartalmú lucernapréslé-agar táptalajon szelektáljuk és tartjuk fenn. 10 napos ferdeagar-tenyészet felületéről 0,02 %-os Tween 80 oldattal spóraszuszpenziót készítünk. A spóraszuszpenzió 5 — 5 miével rázott inokulum tenyészetet készítünk az alábbi összetételű táptalajon: 0,3 % 0,i % 0,2 % 0,1 % 0,25 % 1,5 % Dozirozás: 100- 100 ml-enként. A pH: 6,8, inkubációs hőmérséklet: 27 °C, rázógépen 250/perc fordulat mellett 96 óráig tenyésztjük. Ezt a tenyészetet használjuk a következő fermentációs lépcső oltásához 5,0 tf% mennyiségben. A szaponin fermentációs táptalaj összetétele a következő: (NH4)2S04 kh2po4 k2hpo4 MgS04.7 H20 Kukoricalek vár(por) Keményítő (NH4)2S04 kh2po4 k2hpo4 MgS04.7H20 Kukoricalekvár(por) Keményítő Luccrnapréslé 0,3 % 0,1 % 0,2 % 0,1 % 0,4 % 2,0 % 5000 ml (0,8 mg/m! szapo-nintur! hf*mnl tes7ttelt Habzásgátló (napraforgóolaj) 0,1 % pH: 6,8 Készülék: 10 literes, üveg, lab. fermentor (KUTESZ). Keverés: 250/pcrc, levegő: 6 liter/perc, hőmérséklet: 27 °C± 1 °C; fermentációs idő: 120 óra. Szaponintartalom a fermentáció végén: 0 — 0.01 mg/ ml. A feldolgozásra kérülő 4,0 liter fermentlevet 90 °C-ra melegítjük és ezen a hőmérsékleten tartjuk 5 percig. A hővel kicsapható fehérjét szűréssel leválasztjuk. Nedves biomassza: 528 g/4,0 liter, 132 g/liter, ami a kiindulási anyag 13,2 %-a. A nedves biomasszát 60 °C-on megszárítva 181,6 g száraz fchérjckonccntrátu-4
