192472. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (E)-5-(2-bróm-vinil)-uracil származékok előállítására
1 2 192 472 A vegyületek vírusszaporodásra gyakorolt hatásának vizsgálatával párhuzamosan vizsgáltuk a fertőzetlen sejttenyészetekre gyakorolt toxicitást is, amit kezeletlen kultúrákhoz hasonlítva naponta mikroszkóposán értékeltünk. A vizsgált vegyületeknél az alkalmazott legnagyobb koncentrációban (100 pg/ml) sem észleltünk toxikus hatást. A vegyületek in vivo körülmények között kifejtett hatását egereken kísérletesen előidézett herpes encephalitissel szemben vizsgáltuk. A kísérletekhez átlagosan 18 g testsúlyú, Balb/C törzsbeli egereket használtunk. Az egereket altatás nélkül intracerebrálisan fertőztük 667 jelzésű vírus 102 IDS0 dózisával. Az egereknek 0,05 ml MÉM tápfolyadékkal hígított vírusszusz - penziót adtunk be. A 667 jelzésű vírus egerekben mért ID50 értéke 106/0,1 ml. A kontrollként visszatartott egereket csak tápfolyadékkal oltottuk be. Az oltás napján és ezt követően minden nap 140 mg/kg hatóanyagot adtunk az egereknek egyszeri dózisban, 0,2 ml térfogatban intraperitoneálisan. A hatóanyagokat fiziológiás nátrium-klorid oldatban feloldva adtuk be; a kontroll csoportba tartozó állatokat csak 5 fiziológiás nátrium-klorid oldattal kezeltük. A vizsgálatokat a következő vegyületekkel végeztük: „A” vegyület: (E)-5-(2-bróm-vinil)-2,2’-anhidro- 3 ’-acetil-1 -(ß-D-arabinofuranozil)-uracil, „B” vegyület: (E)-5-(2-bróm-vinil)-2,2’-anhidro-l'0 (j3-D-arabinofuranozil)-uracil, és BrVdU: (E)-5-(2-bróm-vinil)-2’-dezoxi-uridin (öszszehasonlításként használt, ismert antiherpetikus hatóanyag). A kezeléshez használt 140 mg/kg-os napi dózist a 15 szakirodalom alapján (Antiviral Research 2, 255 (1983) mint várhatóan hatásos dózist választottuk meg. A vizsgálatot nyolc napon át folytattuk, és mindennap megszámláltuk a túlélő egereket. Az eredményeket a II. táblázatban közöljük. 20 II. táblázat Oltást követő Túlélő/oltott egerek száma napok száma Kontroll BrVdU „A” vegyület ,JB” vegyület 1. 5/5 5/5 5/5 5/5 2. 5/5 5/5 5/5 5/5 3. 5/5 5/5 5/5 5/5 4. 5/5 5/5 5/5 5/5 5. 5/5 5/5 5/5 5/5 6. 5/5 4/5 5/5 5/5 7. 2/5 4/5 5/5 3/5 8. 1/5 3/5 5/5 2/5 Ebben a kísérletsorozatban a vizsgált vegyületek az alkalmazott koncentrációkban nem mutattak toxikus 40 hatást. Az (I) általános képletű vegyületeket, illetve azok gyógyászatiig alkalmazható savaddíciós sóit a szoká sós gyógyszerészeti hordozó-, hígító- és/vagy segédanyagok felhasználásával ismert módon gyógyászati 45 készítményekké, például tablettákká, pirulákká, kapszulákká, kúpokká, injekciós oldatokká, szuszpenziókká vagy emulziókká alakíthatjuk. Kívánt esetben a gyógyászati készítményekhez az (I) általános képletű vegyületeken, illetve azok savaddíciós sóin kívül a ké- 50 szítmény hatásspektrumát szélesítő, a beteg állapotát javító, azonban az (I) általános képletű vegyületekkel szinergista hatást nem mutató egyéb ismert gyógyhatású anyagokat (például ismert gyulladásgátlókat, ismert vírusellenes hatóanyagokat, vitaminokat, robo- 55 ráló anyagokat, lázcsökkentőket, fájdalomcsillapítókat stb.) is adhatunk. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 60 1. példa (E)-5-{2-Bróm-vinil)-2,2' -anhidro-3' -O-acetil-] -(ß- D-arabinofuranoz il)-uracil-h idrokbrid (1. sz. vegyület) előállítása 25 g (0,071 mól) (E)-5-(2-bróm-vinil)-uridin 250 65 ml vízmentes acetonitrillel készített szuszpenziójához 35,5 g (0,179 mól) acetfl-szalicilsav-kloridot adunk, és az elegyet 10 percig 50-60 °C külső hőmérsékleten keverjük. 10 perc elteltével éles, tiszta oldatot kapunk. A melegítőfürdőt eltávolítjuk, és az elegyet szobahőmérsékleten még 1 órán át keverjük. 15-20 perc elteltével megindul a kristályok kiválása. A kivált kristályokat kiszűrjük, majd az anyalúgot csökkentett nyomáson 50 °C-os fürdőhőmérsékleten .bepároljuk. A szirupszerű maradékot 100 ml éténél eldörzsöljük. Az eldörzsölés hatására kivált kristályokat kiszűijük és 20 ml éterrel mossuk. 25 g nyers terméket kapunk; op.: 120-130 *t. A nyers terméket 50 ml, 2—3 tömegé hidrogénkloridot tartalmazó metanolban oldjuk, az oldatot szükség esetén szűrjük, majd ötszörös térfogatú étert adunk hozzá. Az elegy et éjszakán át hűtőszekrényben tároljuk. Másnap a kivált kristályokat kiszűijük és szárítjuk. 20 -22 g (74—81%) (E)-5-(2-bróm-vinil)- 2,2’-anhidro-3’0-acetil-l-(/3-D-arabinofuranozil}-uracilhidrokloridot kapunk;op.: 152—155 °C. Elemzés a C, 3 Hj 3BrN2 06 .HC1 képlet alapján: számított: C:35,53%,H:3,76%,N:7,68%,Br:21,32%, Cl: 9,46%, talált: C:35,35%,H:4,10%,N:7,50%, Br:21,62%, Cl: 9,50%. 4
