192370. lajstromszámú szabadalom • Jégeső elleni védekezésre alkalmas jégkristályképző hatóanyagot tartalmazó kompozíció
1 192.370 2 jutnak el a felhőszintekig. E módszer hátránya, hogy csak bizonyos időjárási helyzetekben, illetőleg földrajzi körülmények között alkalmazható. A repülőgépes !;enerátorok segítségével viszont az anyagrészecskéket ényegesen könnyebb a szükséges helyre, a megfelelő koncentrációban bejuttatni. A szilárd halmazállapotú készítményt repülőgépre szerelt pirotechnikai patronok segítségével lehet a kívánt légtérbe juttatni. A találmány szerinti kompozíció előnye az ismertekkel szemben az, hogy- A környezetet nem szennyezi, a talajfelszínre kerülve mikrobiológiai úton lebomlik, — hatékonysága felülmúlja az ismert szervetlen anyagokét, — aktivitási küszöbhőmérséklete -3 C-nál kezdődik és aktivitási spektruma -10°C-ig terjed - az ólom-jodid -7,5°C-nál. az ezüst-jodid 4^°C-nál kezdődő és -15°C, - 206C-nál befejeződő aktivitási spektrumával szemben, — a kompozíció előállításának fajlagos költsége jóval kedvezőbb, mir.! az eddig ismert anyagoké. A találmány szerint alkalmazott mikroorganizmusok ismertek; Deponálási helyük és számuk a következő: Pseudomonas syringae pv. syringae Van Hall N.C.P.P. B. (G.B.) 2 507; Erwinia herbicola (Lohnis) dye N.C. P.P.B. 2 281; Pseudomonas fluorescens migula N.C.P.P.B. 1598. (National Cellection Plant Pathogenic Bacteria) A találmány szerinti kompozíció hatóanyagát úgy állítjuk elő, hogy az ismert módon sterilizált tápoldatba beoltunk 10-10® számú Pseudomonas syringae, Erwinia herbicola vagy Pseudomonas fluorescens baktériumot vagy ezen baktériumok elegyét, majd a beoltott tápoldatot 20—30 °C-on 24—36 órán át rázatjuk, ezután a sejteket tartalmazó masszát elválasztjuk a felülúszótól. Adott esetben az így nyert baktériummasszát 50- 100 tömeg% mennyiségű 0,1-2 tömeg%-os, célszerűen 6,5-7 közötti pH-jú puffer oldattal, előnyösen alkáli-dihidrogén-foszfáttal, hígítjuk, majd ultrahanggal feltárjuk és az elroncsolt sejteket előnyösen ,jiofílizálással” vízmentesítjük vagy a masszához 10—80 tömeg%-os glükóz oldatot keverünk és a feltárt baktériummasszát centrifugálással, illetve kromatográfiás úton különítjük el. Úgy is eljárhatunk, hogy a baktérium masszát ultrahanggal kezeljük, majd ezután 20 000 — 40 000 g értékkel centrifugáljuk és így elkülönítjük az ép sejteket és a sejthártyát. Az így előállított sejthártyát mossuk, majd elválasztjuk a mosófolyadéktól. A találmány szerinti kompozíció 0,001-95 tömegé hatóanyagot és a 100 tömeg%-hoz szükséges mennyiségben folyékony hordozót, előnyösen 0,1-1 tömeg%-os alkáli-klorid oldatot vagy 0,1-2 tömeg%os alkáli-hidrogén-foszfát oldatot, vagy szilárd hordozót, előnyösen kovafóldet, szilikagélt vagy zeolitot vagy polimert, előnyösen cellulóz-acetátot vagy nátrium-poliakrilátot tartalmaz. A baktériumok tenyésztésére az ismert összetételű tápoldatokat vagy speciális adalékokat tartalmazó tápoldatot alkalmazhatunk. A találmány szerinti kompozíciót, illetve a hatóanyag előállítási eljárását a következő példákkal mutatjuk be. 1. példa 2 liter mennyiségű dextróz-monohidrát tápoldatot 30 percig 110°C-on autoklávban sterilezőnk, majd steril körülmények között 103 számú Pseudomonas syringae baktériummal inokuláljuk. Ezután 28°C-on 24-36 órán keresztül rázatjuk vízfürdőben. Ekkor a baktériumok száma 10‘6 -102 3- -ra növekedik. Az oxigén-ellátást steril levegő bevitelével biztosítjuk. Az így kapott tenyészetet 24 órára 0°C-os (jeges) fürdőbe helyezzük. A sejteket a tápoldattól 0°C-on választjuk el centrifuga segítségével, 400 fordulat/perc mellett, 20 perc időtartam alatt. A leülepedett baktériummasszát (25 g/1 tápoldat) 25 cm3 20 M.10 6 kg koncentrációjú fosfát pufferrel (KH2P04; ph 7,0) vesszük fel. Mind a baktériummasszát, mind a baktériummentes felülúszót jégkristálygóc képző kompozíció előállítására használjuk. 2. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy a tápoldatba nem Pseudomonas syringae-t hanem 1CT számú Erwinia herbicola baktériumot oltunk. 3. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a tápoldatba nem Pseudomonas syringae-t • hanem 10” számú Pseudomonas-fluorescens baktériumot oltunk. 4. példa Az 1. példa szerinti baktériummasszát ultrahangos sejtfeltárásnak vetjük alá. Az alkalmazott ultrahangos készülék teljesítménye 250 W, a kezelés 20 másodpercig tartott, amelyet 20 másodperces szünetekkel tízszer megismételtünk. Az oldat felmelegítését (amely a szerves anyag károsodását okozhatja) külső borítású jeges fürdő alkalmazásával akadályozzuk meg. A teljesen feltárt sejteket tartalmazó szuszpenziót ezután gömblombikba öntjük és cseppfolyós levegővel megfagyasztjuk, liofilizáljuk +4°C-on 2,6 kPa vákuumban New Brunswick gyártmányú készüléken. A liofilizátumból egy hígítási sort készítünk 0,05-3 mg/cm3 tartományban, oldószernek lOm.10"® kg koncentrációjú foszfátpuffert (KH2P04) alkalmazva. A mintákból, valamint a pufferből bemérünk 0,5 cm3-t Eperdorf centrifuga csövekbe. Ezután a csöveket egy hőmérsékletszabályozó rendszer segítségével 5°C/óra hűtési sebességgel 0°C-ról -20°C-ra hűtjük. Megállapítottuk, hojty a hígítási sor minden tagja egységesen 4,0 és 4,3 l! között megfagyott, tehát a fermentációval előállított, ultrahanggal feltárt baktérium massza kristálygócképző sajátsággal rendelkezik. 5. példa Az 1. példa szerint előállított baktériummasszát 1:1 arányban 2 M-os glükóz oldattal szobahőmérsékleten 25-30 percig kevertetjük. Ezután a masszát centrifugáljuk és a felülúszót DEAE Sephadex A 50 ion5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
