192245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok által termelt korrinoidok átalakítására ciano korrinoidokká
1 192 245 2 rinoidokat tartalmazó sejteket szeparálással elkülönítjük. A kapott biomassza összes korrinoidtartalma 7,5 g, A biomasszához 20 liter vizet adunk, a pH-t sósavval 4,0-re állítjuk és az elegyet autoklávban 10 percig 120 °C-on tartjuk. Lehűtés után a sejttörmeléket szeparálással elkülönítjük. Az így kapott tiszta oldat 5,1 g hidroxokobalamint és 2,4 g egyéb korrinoidot tartalmaz. Az oldatot 35 liter hidrogén-ciklusban levő Amberlite IRC 50 kationcserélő-oszlopon engedjük át, amely megköti az oldatban levő korrinoidokat. Ezután 5 liter vízzel kimossuk a gyanta-oszlopot, majd 40 mg nátrium-cianidot tartalmazó 40 liter vizet engedünk át a gyanta-oszlopon 20 liter/óra sebességgel. Ezt követően vízzel mindaddig mossuk, míg az átfolyt lé cianid-ionokat már nem tartalmaz. A cianid-ionokat tartalmazó mosóvizet összegyűjtjük. Szabad cianid-ion tartalma 0,19 mg/liter. A kationcserélő gyanta-oszlopról a ciano-korrinoidokat ismert módon 80 térfogat%-os vizes acetonnal oldjuk le. Az eluátumból az acetont vákuumban lepároljuk. Az így kapott vizes oldat 3,8 g cianokobalamint és 1,7 g egyéb ciano-korrinoidot tartalmaz. Hidroxokobalamin-tartalom nem mutatható ki nagynyomású folyadékkromatográfiával az oldatban. Az oldatból ismert módon, például fenol és kloroform 1:6 arányú elegyével történő kivonatolás, majd a hatóanyag vizes fázisba való visszavitele és aceton hozzáadása útján kristályos cianokobalamin állítható elő. 4. példa A 3. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy a feltárás és szeparálás után nyert oldatból a korrinoidokat pH 3,5-re savanyítás után 2 súly%-nak megfelelő mennyiségű montmorilloniton adszorbeáltatjuk. Az adszorpció befejezése után a deritőföldet szűréssel elkülönítjük és vízzel semlegesig mossuk. Ezután az adszorbenst 10 liter 4 mg/líter koncentrációjú vizes nátrium-cianidoldattal 30 percig keverjük, azután leszűrjük és a szűrőn maradt adszorbenst 20 liter vízzel mossuk. A korrinoidokat azután 60 tf%-os vizes etanollal oldjuk le az adszorbensröl. Az eluátumból az etanolt vákuumban lepároljuk. Az igy kapott vizes oldat 3,5 g cianokobalamint és 1,6 g egyéb cianokorrinoidot tartalmaz. 10 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás mikroorganizmusok által termelt korrinoidok átalakítására ciano-korrinoidokká ciani- 5 dokkal való reagáltatás útján, azzal jellemezve, hogy az ismert módon, célszerűen hőkezeléssel, szulfit-ionok jelenlétében vagy enélkül feltárt fermentlevet - adott esetben önmagukban ismert tisztítási műveletek után - valamely makroretikuláris 20 adszorbenssel vagy valamely kationcserélő gyantával hozzuk érintkezésbe, majd az adszorbens illetőleg ioncserélő felületén megkötött korrinoidokat cianid-ionokat tartalmazó vagy ilyeneket leadni képes vizes oldatnak a korrinoidokra számítva 25 1,1-2,0-szeres feleslegben levő cianid-iont szolgáltató mennyiségével hozzuk érintkezésbe, azután az adszorbenst illetőleg ioncserélőt vízzel mossuk és a képződött ciano-korrinoidokat ismert módon, célszerűen vizes etanollal leoldjuk. 30 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás hőkezeléssel feltárt fermentlevek feldolgozására, azzal jellemezve, hogy a hőkezeléssel feltárt szüretien fermentlevet makroretikuláris adszorpciós gyantával hozzuk érintkezésbe célszerűen mozgóágyas technológiá- 35 val, majd az adszorbeált korrinoidokat tartalmazó gyantát egy, a cianid-ionokat a korrinoidok menynyiségére számítva, 1,1-2,0-szeres feleslegben tartalmazó vizes oldattal hozzuk érintkezésbe és a továbbiakban az 1. igénypontban leírt módon já- 40 runk el. Rajz nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel : Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (878400/09) 89-0137 — Dabasi Nyomda, Budapest — Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató
