192165. lajstromszámú szabadalom • Eljárás BBM-1644 jelű antibiotikum előállítására
1 192165 2 A találmány tárgya eljárás új tumorgátló antibiotikum előállítására és elválasztására. A találmány szerinti BBM-1644 jelű tumorgátló antibiotikum a tumorgátló fehérje-antibiotikumok új tagja. Az antibiotikumok e csoportjába tartozik például a neokarzinosztatin, makromomicin és auromomicin. A neokarzinosztatin (zinosztatin) 10700-as molikulasúlyú savas fehérje-makromolekula, amely 109 aminosavból álló, két diszulfid-híddal összekötött egyetlen polipeptidláncból áll. A neokarzinosztatinnak a Streptomyces carzinostaticus var. neocarzinostaticus törzs fermentálásával való előállítását a 3,334,022 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a J. Antibiotics 18, 68-76 (1965) közleményben ismertetik. A makromomicin semleges vagy gyengén savas polipeptid, melynek hozzávetőleges molekulasúlya 15000. A makromomicinnek Streptomyces macromomyceticus (NIHJ MC-8-42) fermentálásával való előállítását a 3,595,954 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a J. Antibiotics 21, 44-49 (1968) közleményben írják le. A makromomicin tisztítását és a tiszta vegyület jellemzésének adatait a J. Antibiotics 29, 415-423 (1976) közleményben ismertetik. Az auromomicin gyengén savas polipeptid, melynek molekulasúlya körülbelül 12500 és izoelektromos pontja pH 5,4 ■ 16 különböző aminosavból áll. Az auromomicin izolálását a Streptomyces macromomyceticus tenyészlevéből és a tiszta termék jellemző tulajdonságait a J. Antibiotics 32, 330-339 (1979) közleményben írják le. A BBM-1644 az ismert polipeptid tumorgátló antibiotikumoktól, mint a neokarzinosztatintól, makromomicintől és auromomicintől fizikaikémiai tulajdonságai, mint a molekulasúly, aminosavtartalom, és papír-elektroforézis alapján különböztethető meg. A találmány szerint BBM-1644-ként megjelölt új tumorgátló fehérje-antibiotikumot állítunk elő, az Actinomadura nemzetség egy új törzsének, az Actinomadura sp. H710-49 törzsnek (ATCC 39144) vizes tápközegben való tenyésztése útján ; a tenyésztést asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó vizes tápközegben szubmerz aerob körülmények között folytatjuk, amíg a tápközegben jelentős mennyiségű BBM-1644 képződik, és a BBM- 1644-et kívánt esetben elválasztjuk a tápközegtől. A találmány magába foglalja a BBM-1644 antibiotikum híg oldatát, nyers kocentrátumát és tisztított szilárd formáját. Az 1. ábra a BBM-1644 infravörös abszorpciós spektrumát mutatja (KBr tabletta). A 2. ábra a BBM-1644 ultraibolya abszorpciós spektrumát mutatja (vízben, 0,01 n HCl-ban és 0,01 n NaOH-ban). A találmány tárgyát a BBM-1644-nek elnevezett új tumorgátló fehérje-antibiotikumnak az Actinomadura nemzetség új törzsének, az Actinomadura sp. H710-49 törzs fermentálása útján való előállítása képezi. A fenti organizmust egy NSzK-ban gyűjtött talajmintáéból izolálták. Az organizmus biológiailag tiszta tenyészetét az „American Type Culture ColIection”-nél (Washington, D.C.) deponálták és ATCC 39144 jelzéssel besorolták annak állandó mikroorganizmus-gyűjteményébe. A BBM-1644 gátolja különböző Gram-pozitív és saválló baktériumok növekedését. Az antibiotikum lizogén baktériumokban fág-indukcióra képes és gátolja limfatikus és szolid tumorok növekedését, így egérnél a P388 leukémiát. Ezért az új antibiotikum baktériumellenes anyagként, vagy emlősöknél daganatgátló szerként alkalmazható. A mikroorganizmus A H710-49 számú, Actinomycetaceae családba tartozó törzset talajmintából izolálták és szokásos módon állították elő jellemzésre alkalmas, biológiailag tiszta tenyészet formájában. A H710-49 törzs mind vegetatív (szubsztrát), mind légmicéliumokat képez. A vegetatív micélium hosszú, elágazó és nem fragmentálódik rövid filamentumokká. Rövid spóraláncok képződnek a légmicélium végén vagy monopódiális elágazásán. A spóraláncok egy láncban 2-15 spórát (többnyire 4-8 spórát) tartalmaznak és alakjuk egyenes, horgas vagy hurkos. A spórák szemölcsös felszínűek, ovális - elliptikus alakúak (0,5 ~ 0,6x0,7 ~ 1,2pm) kerek vagy hegyes végződéssel. Az érett spórákat gyakran üres hifák választják el egymástól. Czapek-agaron és Bennett-agaron tenyésztve a vegetatív micéliumon a hifák végén esetenként kitüremlés figyelhető meg. Rajzóspórák, sporangiumok vagy szkleróciumszemcsék egyetlen vizsgált táptalajon sem láthatók. A Streptomyces nemzetség közönséges fajtáitól eltérően a H710-49 törzs kémiailag meghatározott tápközegekben és természetes szerves tápközegekben lassan növekedik és kevés Iégmicéliumot képez. A légmicélium színe fehér, és glicerin-aszparing agarban spóraképzés után pirosas árnyalatú lesz. A vegetatív micéliumtömeg színtelen, sárga, vörösesbarna vagy sötét szürkésbama. Melanoid pigment nem képződik, de glicerin-aszparagin agarban, tirozin agarban és glicerinnel, L-arabinózzal, D-xilózzal, L-ramnózzal, D-glükózzal, D-fruktózzal, trehalózzal vagy D-mannittal kiegészített Pridham-Gottlieb alapagarban citromsárga diffúz pigmentáció látható. A H710-49 törzs 20°, 28° és 37 °C-on növekedik, de nem nő 10° vagy 41 °C-on. 10% NaCl-ra érzékeny, de 7%-ra nem, és rezisztens 0,001% lizozimmal (baktériumsejtfal-bontó enzim) szemben. D-galaktózt, D-mannózt, szacharózt, raffmózt és inozitot a törzs nem hasznosít. A H710-49 törzs tenyésztési és fiziológiai jellemzőit az 1. illetve 2. táblázat mutatja. A törzs szén-hasznosítási képe a 3. táblázatban látható. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
