192162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 47934 jelű antibiotikum előállítására
1 19? 162 2 A másik adagból származó csapadékot 50 ml vízben szuszpendáljuk, kémhatását pH 7,5-re állítjuk 5n vizes nátriumhidroxid oldattal és fagyasztva szárítjuk. 226 mg vízoldékony 20%-os hatóanyagtartalmú nyers A 47 934 jelű antibiotikumot nyerünk. Ezek a nyers A 47 934 jelű antibiotikum preparátumok ismert módszerekkel, például Diaion PH-2Q gyanta vagy fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia alkalmazásával tisztíthatok. 4. példa A 4. példában az A 47 934 jelű antibiotikum fordított fázisú kromatográfiával történő tisztítását mutatjuk be. 30-40 g nyers A 47 934 jelű antibiotikumot feloldunk 350 ml víz-acetonitril 12:8 arányú keverékében, pH 8 kémhatásnál és az oldatot rávisszük 4 liter fordított fázisú gyantát (Whatmann Silicagel LP-l/Cjg) tartalmazó 100 egységes Chromatospacra (Instruments S.A., Inc., Metuchen, N.J.). A gyantát előzetesen, literenként 2 g ammóniumacetátot tartalmazó víz-acetonitril 86 : 14 arányú keverékével ekvilibráljuk. A minta felvitele után az oszlopot ugyanezzel az oldószer-rendszerrel fejlesztjük ki, 400 ml frakciókat gyűjtve és 254 nm-en nyomonkövetve az elúciót. Minden"frakciót analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopon vizsgálunk, ehhez Zorbax ODS gyantával töltött 0,25 x 25 cm méretű oszlopot használunk. Eluáláshoz literenként 2 g ammóniumacetátot tartalmazó víz-acetonitril 82 : 18 rendszert alkalmazunk és az oszlopról lejövő anyagot 225 nm-en detektáljuk. A csak A 47 934 jelű antibiotikumot tartalmazó frakciókat (így például a különböző nyers A 47 934 jelű antibiotikum preparátumoknál a 32-60., 37-75. vagy 51-76. frakciókat) egyesítjük és a térfogatot kb. 1 literre bekoncentráljuk. Nyolc hasonló futtatásból származó koncentrátumot egyesítünk és a kb. 8 litert kitevő oldatot 2 liter, vízágyban lévő Diaion HP-20 gyantát tartalmazó oszlopra visszük, hogy ezzel a kromatográfiás művelettel eltávolitsuk az ammóniumacetátot az egyesített koncentrátumból. Az oszlopot 6 liter vízzel mossuk és az antibiotikumot 4 liter víz-metanol 4 : 1 arányú rendszerrel, majd 6 liter víz-metanol 1 : 1 arányú rendszerrel eluáljuk. A 20%-os metanolos eluátumot 400 ml-re koncentrálva és liofilizálva, 14,82 g erősen tisztított A 47 934 jelű antibiotikumot nyerünk. Az 50%-os metanolos eluátumot 1 literre koncentrálva és liofilizálva 55,6 g erősen tisztított A 47 934 jelű antibiotikumot kapunk. Ennél a sótalanító lépésnél 81 %-os összkitermelést érünk el, melynek fizikai állandói megegyeznek a kiírás bevezető részében megadottal. 5. példa Az 5. példában az A 47 934 jelű antibiotikum kristályosítását mutatjuk be. Egy gramm erősen tisztított A 47 934 jelű antibiotikumot feldoldunk 50 ml acetonitril-víz 60 : 4U arányú keverékében és további acetonitrilt adunk hozzá zavarosodásig. Szobahőmérsékleten történő 16 órás állás után nyúlós, sötét anyag válik ki, amit eltávolítunk és az oldathoz további acetonitrilt adunk zavarosodásig. A szobahőmérsékleten történő további állás közben kivált kristályokat szűréssel kinyerjük, acetonitrillel mossuk és szárítjuk. A kristályos anyag tömege 750 mg. Az anyagot 50 ml acetonitril-víz 60 40 arányú keverékében oldva és 300 ml acetonitrilt keverve az oldathoz, újra kristályosítjuk. A szárított kristályos anyag tömege 550 mg. További 100 °C hőmérsékleten, csökkentett nyomáson történő szárításnál 11% tömegveszteséget tapasztalunk, az illékony oldószerek eltávozása miatt. 6. példa A 6. példában az A 47 934 antibiotikum mononátr umsójának elkészítését mutatjuk be. 130 mg A 47 934 jelű antibiotikumot tartalmazó 16 ml vizes oldathoz (0,1 mól, pH 4,8) 0,4 ml 10 mg/ml koncentrációjú nátriumhidroxid oldatot (0,1 mól) adunk. A kapott oldat pH 7,2 kémhatású. Az oldatot fagyasztva szárítjuk és 153 mg A 47 934 mononátriumsót kapunk (Na = 2,4%). 7. példa A 7. példában az A 47 934 jelű antibiotikum dinátriumsójának előállítását írjuk le. 130 mg A 47 934 antibiotikumot tartalmazó 16 ml vizes oldathoz (0,1 mól, pH 4,8) keverés mellett 0,8 ml 10 mg/ml koncentrációjú vizes nátriumhidroxid oldatot (0,2 mól) adunk. Az oldat kémhatása pH 8 1 lesz. Az oldatot fagyasztva szárítjuk és az A 47 934 antibiotikumnak 156 mg nátríumsóját nyerjük. (Na = 3,6%). 8. példa A 8. példában az A 47 934 antibiotikum monokáliumsójának előállítását írjuk le. 130 mg A 47 934 antibiotikumot tartalmazó 16 ml vizes oldathoz (0,1 mól, pH 4,8) keverés mellett 0,56 ml 10 mg/ml koncentrációjú káliumhidroxid oldatot (0,1 mól) adunk. A kapott oldat kémhatása pH 7,1. Az oldatot fagyasztva szárítjuk és az A 47 934 antibiotikumnak 154 mg monokálimsóját nyerjük (K = 2,14%). 9. példa A 9. példában az A 47 934 antibiotikum dikáliumsójának előállítását írjuk le. 130 mg A 47 934 antibiotikumot tartalmazó 16 ml vizes oldathoz (0,1 mól, pH 4,8) keverés mellett 1,12 ml, 10 mg/ml koncentrációjú káliumhidroxid oldatót adunk. A kapott oldat kémhatása pH 7,95. Az oldatot fagyasztva szárítjuk és az A 47 934 antibiotikumnak 158 mg dikáliumsóját nyerjük (K = 3,94%). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
