192129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-41030 jelzésű antibiotikumok előállítására
1 2 A találmány tárgyát antiinikrobiális tulajdonságokkal rendelkező antibiotikumoknak a Streptomyces nemzetségbe tartozó, előzőleg ismeretlen mikroorganizmus tenyésztése általi előállítása képezi. Ezen új vegyületek hasonlóak a 4.322.343. és a 4.322.406. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetettekhez. Nagy szükség van új antibiotikumok létrehozására, mivel állandóan fenyeget az a lehetőség, hogy kórokozó mikroorganizmusoknak antibiotikum-specifikus rezisztens törzsei fognak megjelenni. Különösen a Gram-pozitív Staphylococcus és Streptococcus nemzetségbe tartozó kórokozók rezisztensek gyakran a szokványosán használt antibiotikumokkal, mint penicillinnel és eritromicinnel szemben (lásd például W.O. Foye, Principles of Medicinal Chemistry, 584-686. oldal, 1974.). A találmány szerint hatásos antimikrobiális hatóanyagnak találtuk az A4!030 komplexet és ennek A, B, C, D, E, F és G faktorát. Ezen új antibiotikumok az előzőleg le nem írt mikroorganizmusnak, a Streptomyces Virginiáé NRRL 12525-nek, vagy „szülőjének”, a Streptomyces Virginiáé NRRL 15156-nak aerob fermentálása útján állíthatók elő, asszimilálható szén-, nitrogénforrásokat és szervetlen sókat tartalmazó táptalajban. Az említett és más organizmusok antibiotikum komplexeket termelnek, amelyek több antibiotikus faktort tartalmaznak, beleértve az A, B, C, D, E, F és G faktorként megélőiteket. Kényelmi okokból- a tenyésztett mikroorganizmust, a Streptomyces Virginiáé NRRL 12525-öt laboratóriumunkban A41030.4 tenyészetnek, és a Streptomyces Virginiáé NRRL 15156-ot A41040-nak nevezzük. Az egyes faktorok infravörös abszorpciós spektrumát a mellékelt rajzokon mutatjuk be: 1. ábra — A41030 A faktor (KBr tablettában), 2. ábra — A41030 B faktor (KBr tablettában), 3. ábra — A41030 C faktor (KBr tablettában), 4. ábra — A41030 D faktor (KBr tablettában), 5. ábra — A41030 E faktor (KBr tablettában), 6. ábra — A41030 F faktor (KBr tablettában), 7. ábra — A41030 G faktor (KBr tablettában). A .komplex” meghatározás a fermentációs irodalomban és e leírásban is az együtt képződő egyéni antibiotikus faktorok keverékét jelenti. A fermentációs antibiotikum-előállításban jártas szakember előtt nyilvánvaló módon az antibiotikum komplexekben képződött egyedi faktorok száma és aránya változó, függően a fermentáció körülményeitől és az alkalmazott törzstől. Az eredetileg Indianapolisban (Indiana) gyűjtött talajmintából izolált Streptomyces Virginiáé (A41030) egy törzsének tenyészetéből kémiai úton indukált, az A41030.4 tenyészetet deponáltuk és részét képezi a „Northern Regional Research Center, U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service”, (Peoria, Illinois 61604) törzstenyészetgyűjteményének, amely a nyilvánosság részére az NRRL 12525 szám alatt hozzáférhető. A komplexképző szülő tenyészetét, a Streptomyces Virginiáét (A41030) szintén deponáltuk a „Nothem Regional Research Centerében és ez a nyilvánosság számára NRRL 15156 szám alatt áll rendelkezésre. Az A41030.4 tenyészetet úgy állítottuk elő, hogy A41030 tenyészetet egymás után mitomicin C-vel, majd N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanídinnal kezeltünk. A szakember előtt érthető módon lehetséges lenne az A41030 tenyészet mutagén kezelése útján további olyan törzseket kitenyészteni, amelyek alapvetően hasonló bioszintetikus képességekkel rendelkeznek, mint a Streptomyces Virginiáé NRRL 12525. Mitomicin C mellett más alkalmas mutagén anyagok az akroflavjnok, akridinnarancs, etidium-bromid és hasonló kémiai anyagok. Bár a mitomicin C-vel együtt N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidint alkalmaztuk, más ismert mutagének, mint ultraibolya, nagy-frekvenciájú és radioaktív sugárzás, röntgen-sugár és más kémiai ágensek is használhatók lennének hasonló mutagenezis kiváltására. Az A41030-at a Streptomyces Virginiáé egy törzseként tartjuk számon, és az A41030.4 tenyészetet a Streptomyces Virginiáé egy kémiailag indukált mutánsaként minősítjük, a Streptomyces avidinij ATCC 27419, a Stretomyces columbiensis ATCC 27425, a Streptomyces goshikiensis ATCC 23914, a Streptomyces griseolavendus ATTC 25457, a Streptomyces lavendulae ATCC 8664, a Streptomyces toxitricini ATTC 19813, és a Streptomyces Virginiáé, Grundy, Whitman, Rdzokr Hanes és Sylvester 1952, ATTC 19817 egyidejű tenyésztését véve alapul. A Shirling és Gottlieb („Methods of Characterization of Stretomyces species”, Int, J. Syst. Bacteriol. 16/3,313-340 /1966/) által javasolt módszereket és táptalajokat használtuk, egyes kiegészítő próbákkal együtt. Az A4! 030.4 tenyészetet a fentebb említett törzsek leírásával is összehasonlítottuk [(„Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology”, 8. kiadás, kiadó R. E. Buchanan és N.E, Gibbons, The Williams and Wilkins Co., .Baltimore, Maryland) és Shirling és Gottlieb, „Cooperative „ Description of Type Strains of Streptomyces , Int J. Syst. Bacteriol. 18/2, 1978 /1968/J. Mivel az A41030.4. semmilyen táptalajon nem képez levegő-micéliumokat és spórákat, ezért különbözik az összes fentebb említett fajtól. Az A41030 és A41030.4 tenyészetének jellemzése Morfológia Az A41030 jól fejlett légmicéliumokat és sporangium tart ókat képez, amelyek csavarodottak és felszínükön hurkok és kampók vannak. Az A41030-at mint elsődleges morfológiai típust Pudham és munkatársai „A guide for the Classification of Streptomycetes According to Selected Groups”, Appl. Microbiol. 6, 52-79 /1957/ „spirálisok” szekciójába és mint másodlagos típust Pridham és munkatársai Tetinaculum-Apertum (RA) szekciójába soroljuk. Az A41030.4 nem képez légmicéliumokat és spórákat. Tenyésztési jellemzők Az A41030, A41030.4 és S. Virginiáé ATCC 19817 különböző táptalajokon megfigyelt növekedési jellemzőit az 1. táblázat tartalmazza. A szín-neveket az „ISCC-NBS Centroid Color Charts Standard Sample No. 2106” (National Bureau of Standards, U. S. Departments of Commerce, 1958) és a „Color Harmony Manual”, 4. kiadás (Color Standards Department, Container Corporation of America, Chicago, Illinois, 1958) megjelölései szerint a ljuk meg. 192.129 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60' 2
