192086. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D-aminosav-oxidáz szubsztrátumok előállítására
1 192.086 2 dietü-éterrel extraháljuk. A szerves fázist vízzel, majd sósvízzel mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, így N-3-(3-trifluor-metil-fenil)-2-propil-alanin (R)-terc-butil-észtert kapunk, amely a kívánt termékké hidrolizálható. A már ismertetett eljárásokkal az alábbi (I) képletű D-aminosav-származékok is előállíthatok: 5) N-2-(3,4-dihdroxi-fenil)etil-glidn hidrobrqmid (o.p.:179°C), 6) N-2-(3,4-dihidroxi-fenil)-etil-alanin (o.p. 264 C, 7) N-(l ,2,3,4-tetrahidro-6,7-dihidroxi-2-naftil)glidn monohidrát (o.p.: 115°C), 8) N-2-(4{dimetil-amino)-2-metil-fenil)-l -metiltil-glicin dihidroklorid(o.p.: 216°C), 9) n-2-(3,4-dimetoxi-fenil)-3-fluor-2-propenil-glidn (E), (o.p.: 188°C), 10) N-2-(3,4-dimetoxi-fenil)-3-fluor-2-propenil-alanin (o.p.: 191°C), 11) N-3-fluor-2-(3-metoxi-fenil)-2-propenil-L-norleudn (Z), (o.p.: 168°C) és 12) N-3-fluor-2-(3-metoxi-fenil)-2-propenil-glián (Z), (o.p.: 190°C). Azt, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek megfelelő szubsztrátumai-e a D-aminosav oxidáznak, egyszerű in vitro vizsgálatokkal, szokásos laboratóriumi módszerek alkalmazásával valószínűsitettük. Az in vitro vizsgálatokhoz közönséges disznóvese D-aminosav oxidázt használtunk. A vegyületeket az enzimatikus reakciókhoz szükséges optimális körülmények között inkubáltuk, majd vagy a hidrogénperoxid képződést, vagy a várt primer amin képződést határoztuk meg a szubsztrátum koncentrádó, inkubációs idő stb. függvényében. Általánosságban a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek beadási módját és dózisát az amino -csoportot tartalmazó terápiás szerek esetében szokásos kiértékelő módszerekkel határoztuk meg. Az enzimhatást az alábbi adatok jelzik in vitro vizsgálatoknál (pH = 8,3) az 5) — 12) vegyületeknek, mint szubsztrátumnak alkalmazása esetén, közönséges disznóvese D-aminosav-oxidáz alkalmazásával (14 egység/mg fehétje:Sigma Chemical Co.,St.Louis): 5) Km = 3 mM 6) Km = 2,5 mM 7) KM=10niM 8) Km = 2 mM 9) Km = 3 mM 10) Km = 0,5 mM 11) KM = 0,6mM 12) Km = 0,6 mM Vmax * 10 umoi/mg íehéije/h vmax = 17 umol/mg fehéije/h (a D-enantiomerre számítva) Vmax = 17 umol/mg fehéije/h Vmax = 2 umol/mg fehéije/h Vmax = 17 umol/mg fehérje/h Vmax = 7 umol/mg fehéije/h SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű D-aminosav oxidáz szubsztrátumok — ahol R jelentése hidrogénatom, vagy 1—6 szénatomos alkil csoport, Rj jelentése- adott esetben egy vagy két 1-4 szénatomos alkoxi-, trihalogén-metil-, hidroxi-, 1-4 szénatomos alkil- vagy dimetil-amino csoporttal helyettesített fenil- vagy naftil-(l—4 szénatomos) alkil- illetve 2-5 szénatomos alkenil-csoport, ahol az alkil- illetve alkenilcsoport még egy helyen halogénatommal lehet helyettesítve, vagy 5 - adott esetben egy vagy két hidroxilcsoporttal helyettesített, adott esetben részben telített fenil- vagy naftilcsoport,- és gyógyászatilag alkalmazható savaddídós sóik előállítására, azzal j e 11 e m e z v e, hogy a) valamilyen RjNHI^ általános képletű vegyüle- 10 tét - ahol R7 jelentése hidrogénatom, 15 20 V ? ? C6HjC-, R^OC—, C6HsOC-csoport, ahol R6 jelentése 1—4 szénatomos álkil-csoport — egy (VIII) általános képletű D-aminosav származékkal — ahol X jelentése lehasítható csoport, így halogénatom, R4 jelentése hidrogénatom vagy egy 14 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkil-csoport — N-alkilezzük valamilyen bázis jelenlétében, 1—24 óráig, -70 és 100°C közötti hőmérsékleten, majd kívánt esetben eltávolítjuk aj; észter és amin védőcsoportokat, vagy 1 b) egy (X) általános képletű karbonil-származékot- melynél a 35 40 45 50 55 csoport jelentése az Rj -gyei megegyező - és egy (III) általános képletű D-aminosavat — melynél R és R4 jelentése a fenti — vagy annak észter-származékát redukálószer, előnyösen hidrogén, és egy megfelelő katalizátor jelenlétében reagáltatunkés adott esetben az észtercsoportot eltávolítjuk, vagy c) egy R,NH2 általános képletű vegyületet a b) eljárás szerint egy (XIV) általános képletű vegyülettel reagáltatunk - melyeknél Rj, Rés R4 jelentése a fenti —, majd a kapott racém keveréket ismert módon a megfelelő D-aminosav-származék D-enantiomerjévé rezolváljuk és adott esetben az észtercsoportot eltávolítjuk. Elsőbbsége: 1983. 12.06.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport és Rj jelentése az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve,hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1983. 12.06.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R jelentése hidrogénatom és Rt jelentése az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vermieteket alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1984.11.09.) Országos Találmányi Hivatal Fk.: Himer Zoltán Kódex 4
