191990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált vinil-3-cefém-4-karbonsav-származékok előállítására
23 191990 24 szárítunk. 129 mg 8. vegyületet kapunk; olvadáspont 230 °C (bomlás). IR (KBr): cm*1 1760, 1680, 1590, 1550, 1520, 1450, 1390, 1350, 1240. UV (foszfátpuffer, pH 7): X*ax, nm (£) 228 (13 000), 292 (16 900). NMR (DzO+NazCCb), & ppm 1,89 (311, d, 6Hz, C=C-CH3), 3,60 (2H, s, 2-H), 5,13 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,20 (1H, s, CH-CO), 5,68 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,99 (1H, d-q, 16 és 6 Hz), 6,54 (1H, d, 16Hz), 6,98 (2H, d, 9Hz, fenil-H), 7,41 (2H, d, 9Hz, fenil-H). 9. eljárás Kristályos 7ß-[D-2-amino-(p-hidroxi-fenil)-acetamido]-3-[(Z)-l-propen-l-il]-3-cefem-4-karabonsav (9. vegyület, BMY-28 100) A 8. eljárás preparatív HPLC-je során kapott első 4 liter frakciót - amely a cisz-izomert tartalmazza - 2 liter térfogatra bepároljuk és híg sósavoldattal pH 3-ra állítjuk be. Az oldatot HP-20 gyantát (1 liter) tartalmazó oszlopra visszük fel és az oszlopot 6 liter vízzel mossuk, amíg a kifolyó víz pH-ja 7 lesz. Ezután az oszlopot 4 liter 30% vizes metanollal eluáljuk. A eluátumot HPLC-vel elemezve az alkalmas frakciókat egyesitjük (mintegy 2,5 liter) és 40 °C alatti hőmérsékleten, csökkentett nyomáson 50 ml-re bepároljuk. Kristályos csapadék képződik. A kristályokat tartalmazó oldatot lehűtjük 0 °C-ra, 2 óráig ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk, a kristályokat leszűrjük, 80% vizes acetonnal, majd 100% acetonnal mossuk. Vákuumban foszfor-pentaoxid felett megszárítva 4,09 g tiszta kristályos terméket kapunk. A színtelen prizmák olvadáspontja 218-220 °C (bomlás); tisztaságuk 95% (HPLC-vel meghatározva). IR (KBr): ^ cm-1 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235. UV (foszfátpuffer pH 7): Xmax nm (£) 228 (12 300), 279 (9800). NMR (DzO+NaHCOa) 6 ppm 1,71 (311, d, 6Hz), C-CH3), 3,27 (1H, d, 18Hz, 2-H), 3,59 (1H, d, 18Hz, 2-H), 5,18 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,22 (1H, s, CH-CO), 5,73 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 5,5-6,0 (1H, m, CH=C), 6,02 (1H, d, 11Hz, CH=C), 6,98 (2H, d, 9Hz, fenil-H), 7,41 (2H, d, 9Hz, fenil-H). Elemi analízis CisHisNsOsS'ldhO-ra: C H N C Számított 54,26 5,06 10,55 8,05 Talált 54,15 5,13 10,30 8,38 54,19 5,08 10,42 8,04. A fenti kristályosításnál képződött anyalúgot 10 ml térfogatra bepároljuk és 20 ml acetonnal kezeljük, az oldatot éjszakán át hűtőszekrényben tartva csapadék válik ki, melyet szűréssel összegyűjtjük, vákuumban foszfor-pentaoxid felett szárítunk és lemérünk (670 mg, HPLC-elemzés alapján 90% tisztaságú). Az anyag 560 mg-ját 200 ml 50% vizes metanolban oldjuk, az oldatot 0,5 g aktív szénnel kezeljük és szűrjük. A szürletet csökkentett nyomáson és 40 °C hőmérsékleten 20 ml térfogatra bepároljuk, majd 5 óráig 5 °C-on tartjuk. A kivált kristályokat szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk és vákuumban foszfor-pentaoxid felett szárítjuk. 227 mg kristályos BMY-28 100 vegyületet kapunk (HPLC-elemzés alapján 98% tisztaságú). Az anyalúgot liofilizálva 181 mg BMY-28 100- -at kapunk, mely 95% tisztaságú (HPLC). 10. eljárás Difenil-metil-7fs-[D-2-( terc-butoxi-karbonil-amino)-2-(p-hidroxi-fenil)-acetamido)-viníl-3-cefem-4-karboxilát (10. vegyület) 3 g (2,95 millimól) benzhidril-7-[2-(N-£erc-butoxi-karbonil-amino)-(p-hidroxi-fenil)-acetamido]-3-(trifenil-foszfonio)-metil-3- -cefem-4-karboxilát-jododit (5. vegyület) 50 ml kloroformban oldunk és az oldatot 3 ml (3 millimól) In NaOH-oldat és 50 ml víz elegyével szobahőmérsékleten 1 percig rázzuk. A szerves réteget elválasztjuk telített NaCl-oldat (20 ml) hozzáadása után és vízzel (3x30 ml) mossuk. A szerves oldathoz 2,5 ml 35% vizes formaldehidoldatot adunk erőteljes keverés és víz-hűtés közben. A keverést 20 percig folytatjuk. A szerves fázist elválasztjuk, vízmentes NazSCN felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepárolt anyagot szili! agéloszlopra visszük fel. Kloroformmal (600 ml) és 2% metanolt tartalmazó kloroformmal (800 ml) eluálva 850 mg (45%) címben megnevezett vegyületet kapunk. Vékonyréteg-kromatográfia (TLC): Rí 0,48 [szilikagél, metanol/kloroform (1:10)]. 11. eljárás 7/j-[D-2-Amino-(p-hi droxi-fenil )-acetamido]-3-vinil-3-cefem-4-karbonsav (11. vegyület, BB-S1064) 850 mg (1,32 millimól) 10. vegyület és 5 ml 90% vizes trifluor-ecetsav keverékét szobahőmérsékleten 1 óráig állni hagyjuk és vákuumban mintegy 1 ml térfogatra bepároljuk. A maradékot 20 ml diizopropil-éterrel eldörzsölve 679 mg sárga port kapunk, melyet 3 ml metanolban oldunk, majd 30 ml vízzel hígítunk. Az oldatot HP-20 oszlopon (50 ml) bocsátjuk át, az oszlopot 200 ml vízzel mossuk és 250 ml 30% metanollal eluáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó eluátumot bepárolva és liofilizálva 197 mg (31%) címben szereplő vegyületet kapunk; olvadáspont 190 1>C (bomlás); becsült tisztasága 60% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
