191858. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil plurilamelláris vesiculumok előállítására

2

1 191 858

2. pufferban történő tárolás során igen magas stabilitású,

3. ellenáll az agresszív fiziológiás környezetnek,

4. a beépült anyagok magas hatékonyságát 5 biztosítja,

5. a szövetekben, illetve sejtekben hosszabb időn keresztül megmarad,

v 6. a beépült hatóanyagokat a testnedvekbe lassan képes beadni,

7. a liposzóma tartalmat a citoszólon keresztül a célsejtbe irányítja,

8. előállítása gazdaságos,

9. a hatóanyagokat in vivo körülmények között, azok biológiailag aktív formájá- ^ ban adja le.

Fenti tulajdonságai miatt az SPLVs különösen használható in vivo körülmények között, terápiás rendszerek vivőanyagaként, mivel a környezeti behatásoknak ellenáll, és nyújtott hatóanyag *0 leadásra alkalmas. Az SPLVs biológiailag aktív vegyületek in vivo körülmények között történő felszabadítására irányuló módszerek, továbbá a betegségek ily módon történő kezelése, így az infekciós medikációja jelen találmányi leírás- 25 ban kerül ismertetésre.

Ábramagyarázat

1. ábra : 30

Különböző koncentrációjú karbamiddal kezelt MLVs és SPLVs membrán stabilitások közötti különbséget mutatja a bomlás százalékában kifejezve, grafikusan szemléltetve.

35

2. ábra :

Egér szemszövetben elhelyezett SPLVs lipid és vizes fázisainak retencióját és in vivo körülmények között az SPLVs-be zárt gentamicin nyújtott kioldódását szemlélteti. 40

3. ábra :

Az SPLVs (A) és az MLVs (B) elektron spin rezonancia abszorpciós spektrumának összehasonlítása. 4g

4. ábra:

Az SPLVs és az MLVs doxyl spin minták ascorbáttal történő redukálásának eltérései.

5. ábra : 50

SPLV-be beépített streptomicin-nel történő

kétlépéses Brucella canis infekció kezelésének hatékonysága B. canis-al fertőzött egerek eltávolított vándorlépén tanulmányozva.

DO

6. ábra:

B. canis infekciók kétlépéses kezelésének hatékonysága SPLV-be épített streptomycint használva B. canis-al fertőzött egerek valamely eltávolított szervén tanulmányozva. SO

7. ábra:

SPLV-be épített streptomycines kétlépéses kezelés hatékonysága Brucella abortus-sal fertőzött tengerimalacok esetében. SS

A jelen találmány szerint előállított SPLVs az eddig ismert liposzómáktól különböző, egyedülálló tulajdonságokkal rendelkezik. Az SPLVs szám szerint néhány és 100 körüli számú kettősrétegből álló lipid vesiculum.

A membrán kettősréteg valamely amfipatikus lipid bimolekuláris rétegből — melyben a nempoláris hidrofób szénhidrogén „farkak” a kettősréteg középpontja felé orientáltak — és a poláris, hidrofil „fej”-ből — mely a vizes fázis felé mutat — áll. A kettősrétegek egymásra fektetésével egy vizes rekesz alakul ki, mely egyfelől a vesiculum nagyságát képezi, másfelől a szomszédos rétegek között elterülő részt alkotja. Számos fehérje, glukoprotein, glukolipid, glukopoliszacharid, és más hidrofób és/vagy amfipatikus anyag a lipid kettősrétegekkel komplexbe vihető.

A SPLVs-t az alábbiak szerint állítjuk elő: Valamely amfipatikus lipidet vagy lipidek keverékét valamely szerves oldószerben feloldjuk. Erre a célra számos szerves oldószer alkalmas, de különösen előnyösen alkalmazható a dietil-éter, fluorozott szénhidrogének, és a fluorozott szénhidrogének és éter keverékei. Ehhez az oldathoz adjuk a vizes fázist és a beépítendő hatóanyagot. Az így kapott kétfázisú rendszert SPLVs-sé alakítjuk oly módon, hogy a vizes anyagot emulgeáljuk, miközben az oldószert lepároljuk. Az oldószer lepárlása bármely ismert bepárlási technikával, így a keveréken keresztül inert gáz gőzének átáramoltatásával, hevítéssel, vákuum lepárlással az ultrahangos kezelés ideje alatt vagy után valósítható meg. Az alkalmazott oldószer térfogatának a nagysága lényegesen meg kell hogy haladja a vizes fázis térfogatát, hogy a vizes anyag teljes emulgeálódása a keverékben biztosított legyen. Gyakorlatilag az eljárás során háromszoros térfogat oldószert használnak a vizes fázis egy térfogatára vonatkoztatva. Ténylegesen az oldószer és a vizes fázis aránya egy vizes fázis térfogatra vonatkoztatva 100 vagy annál több lehet. A lipid mennyiségnek elegendőnek kell lenni, fele mennyiségben kell jelen lenni, hogy az emulgeált cseppeket alkalmasak legyenek beborítani (40 mg lipid/ml vizes fázis). A fenti arányokat a gyakorlatban csak a gazdaságossági tényezők befolyásolják, de a gyakorlatban 15 g lipidhez 1 ml vizes fázist felhasználva SPLVs-t eredményez.

A találmány szerinti eljárással előállított lipid vesiculumok különböző szupramolekuláris és a konvencionális liposzómáktól eltérő szerkezetet mutatnak. A találmány szerint eljárva az eljárás első lépésében alkalmazott hőmérséklettartomány 4-60 °C között van, tekintettel az alkalmazott lipid fázis tranziciós hőmérsékletére. A fenti megoldás előnye, hogy a hőfoklabilis termékben a proteinek denaturálása elkerülhető, mivel azok az SPLVs-be beépülnek, mely SPLVs foszfolipidből, így disztearoilfoszfatidilkolinból állítható elő, de a fázis-tranziciós hőmérséklet felett az konvencionális liposzómává alakul. Az eljárás során általában több mint 20% vízoldható anyagot és több mint 40% lipid oldékony anya-Az SPLVs előállítása

4