191627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új imidazol-származékok és sóik, valamint ilyeneket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 191 627 10 Összetétel: (1) képlet szerinti imidazol-vegyület (7. példa szerinti) 15,0 g tejsav B.P. 3-as pH beállításához szükséges mennyiségben víz (injekcióhoz B.P.) 100 ml-re A fenti vegyületet a víz 3/4 részében szuszpendáljuk, majd hozzáadunk annyi tejsavat, hogy a pH értéke 3 legyen és a készítményt a maradék vízzel kiegészítjük. Az oldatot ezután 0,22 um pórusátmérőjű membrán-szűrőn átengedve sterilizáljuk és steril körülmények között szintén steril 1 ml-es ampullákba adagoljuk. Minden ampulla 150 mg hatóanyagot tartalmaz. F) példa Injekció-készítmény előállítása Összetétel: (I) képlet szerinti imidazol-vegyület (7. példa szerinti) 15,0 g citromsav 3-as pH-hoz szükséges mennyiségben klór-krezol 0,1 g víz (injekcióhoz, B.P.) 100 ml-re A fenti vegyületet a víz 1/2 részében szuszpendáljuk, hozzáadunk annyi 10%-os citromsav oldatot, hogy az anyag feloldódjon és az oldat pH-ja 3-as legyen, majd a fennmaradó vízzel a kívánt térfogatra hígítjuk. A sterilizálást 0,22 |Um pórusátmérőjű membrán-szűrőn való áteresztéssel végezzük. A kapott készítményt steril körülmények között szintén steril 25 ml-es fiolákba adagoljuk, steril gumidugóval bedugaszoljuk és alumíniumsapkával lezárjuk. A készítmény minden ml-el50 mg hatóanyagot tartalmaz. A Tromboxán A2 szintézis inhibiciójának meghatározása A vizsgálandó vegyületből alkalmas oldószerrel 5 mg/ml koncentrációjú oldatot készítünk és 20 jul-ét 0,8 ml 100 mmólos trisz-puffer oldathoz adjuk (Ph = 7,5). 5 ml ló PRP vérlemezkéket centrifugálunk, majd reszuszpendáljuk 100 ^ul trisz-puffer oldatban. Ultrahangos vagy fagyasztásos és újraolvasztásos bontás után a vérlemezke-szuszpenziót a hatóanyag oldatához adjuk és 5 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután 100 /ul puffer oldatban oldott 300 ng (50 nCi) (1-14C)-aracnidonsavat adunk hozzá és a keveréket 30 percig 37 °C-on inkubáljuk. A reakció menetét ezután 50 ^ul 2 n sósav hozzáadásával megállítjuk, a képződött terméket 1,5 térfogatnyi etil-acetáttal extraháljuk és 30 másodpercig centrifugáljuk. Ezután 1 ml telített nátrium-klondot adunk a vizes fázishoz az emulzió-képződés megakadályozására. A szerves fázist eltávolítjuk, nitrogénatmoszférában megszárítjuk és a terméket 50 |ul kloroform/metanol elegy - ben oldjuk és kvantitative TLC lemezekre visszük át a kívánt analízis elvégzése céljából. A lemezek kifejlesztését 90:8:1:0,8 arányú kloroform:metanol:ecetsav:víz elegyével végezzük, szárítjuk, majd 2-3 napon át figyeljük autoradiográfiával. Kifejlesztés után az autoradiogrammokat megvizsgáljuk, hogy az aktív vegyidet mutat-e szelektív inhibiciós hatást, a radioaktív TXB PGD2, PGE2 és PGF2 zónákat leválasztjuk és radioaktivitásukat szcintillációs számlálóval meghatározzuk. Az enzim hatásának 507-os csökkentéséhez (EDJ0) szükséges aktív vegyület koncentráció értékeit a következő táblázatban foglaljuk össze. A) táblázat Példaszám EDso (/u8/m0 1 6,6 2 0,5 3 0,05 4 0,08 6 0,015 10 0,35 Tromboxán A2 szintézis - inhibitorok hatásidőtartama in vivo 2,5 kg súlyú N.Z. hím nyulakat nátrium-pentabarbitonnal és klorállal elaltattunk és az egyik nyaki artériába kanült vezettünk be. Ezen keresztül 1 ml-es vérmintákat vettünk le, kettőt kontrollként, egyet, amelyhez 10 mg indometacint adagoltunk, vakpróbára. Ezután a kísérleti állatoknak orálisan adagoltuk a találmány szerinti aktív vegyületet, és a további vérmintákat félórás intervallumokban, 5—8 órán át vettük le. A kontroll mintákat és az aktív vegyületet tartalmazó vérmintákat üvegcsőben 45 perces 37 °C hőmérsékleten végzett inkubálással megakasztottuk, indometacint adagoltunk hozzá, majd a szérumot centrifugálással szétválasztottuk, lepipettáztuk és RIA analízissel meghatároztuk a Tromboxán A2 koncentrációt. Ezután meghatároztuk azt az időt, amelyen keresztül az inhibitor csökkentette a Tromboxán A koncentrá-2 ciót. Vizsgálataink alapján az 1. példa szerinti vegyület hatása 160 mg/kg dózis adagolással legalább 5 órán át tartott, míg a 3. példa szerinti vegyület 2 mg/kg dózis adagolásával több mint 7 órán át hatott. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás új (I) általános képletű imidazol-származékok — a képletben R jelentése halogénatom, W jelentése karboxil- vagy (1-4 szénatomos)-alkoxi-karbonil-csoport, A jelentése 1—3 szénatomos alkilén cső port és B jelentése egyenes vagy elágazóláncú, 2—3 szénatomos alkilén csoport — és fiziológiailag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy imidazolt vagy sóját egy (II) általános képletű vegyülettel — a képletben A, B, R és W jelentése a fenti és Z jelentése lehasadó csoport — reagáltatjuk, majd kívánt esetben a kapott vegyületet savaddíciós sójává alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti ejárás azzal jellemezve, hogy olyan (II) általános képletű kiindulási vegyületet használunk, amelyben A, B, R és W jelentése az 1. igénypont szerinti és Z jelentése halogénatom. 3. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületet — amely képletben R, W, A, és B jelentése az 1. igénypontban u 10 15 20 25 30 .35 40 c5 E0 55 60 65 6
