191432. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-amino-N-(1H-tetrazol-5-il)-benzamid formil-származékainak előállítására
3 19 432 4 homogenizáltuk és az antigén-kihívás előtt 5 perccel 60 mg/kg mennyiségben intraperitoneálisan adtuk, vagy 5-240 perccel az antigén-kihivás előtt 100 mg/kg mennyiségben per-os adtuk. 5. Antigén-kihívás és a reakció értékelése: oval- l bumint (0,1—1,0 mg 0,5% Evan’s Blue szinezékoldatban) fiziológiás sóoldatban adtunk a patkányoknak intravénásán. 30 perc elteltével a kapott PCA- reakciókat mértük oly módon, hogy a bőr egy adott felületén az átlagos átmérőt és színintenzitást meghatá- 10 :roztuk. A tesztvégyület aktivitását a kontroli-reakciókhoz viszonyított gátlás százalékában fejeztük ki. Fentiek szerint eljárva a találmány szerinti vegyülct mind intraperitoneálisan, mind orálisan aktívnak mutatkozott, ahogyan azt az alábbi adatok jelzik. Gyógyászati hatás (gátlás) , „ , , orálisan adagolva, i.p. alkalmazás 5 perccel azantigén. eseten próba előtt 20 Találmány szerinti vegyület 89 t% 91 t% DNCG 100 t% 0t% 25 A PCA-teszt aktivitásán túlmenően azt találtuk, hogy a találmány szerinti vegyület patkányon végzett Passive Peritoneal Anaphylaxis (PPA) teszt alap- 33 ján a Irisztamin-fclszabadulást is gátolja. Módszerünket az alábbiakban ismertetjük: PPA-teszt: 1. Antiszérum: az ovalbuminná reagáló antitestet 3g felnőtt hím B6DjFi egerekben hoztuk létre. 2. Kísérleti állatok: antitest-recipiensként felnőtt hím Sprague-Dawley vagy nőstény Wister Kyoto patkányokat használtunk. A kísérleti állatokat 5— 14 napon keresztül etetve, és vizet ad lib. adagolva 40 aklimatizáltuk. 3. Szenzibilitás: a recipiens-patkányokat az előző kísérletekben meghatározott egér-antiovalbumin-antiszérum megfelelő fiziológiás sóoldatának 2 milliliterével intraperitoneális injektálásával aszenzibilizáltuk. 45 A szenzibilizálás 2 órával az antigén-kihívás előtt történt. 4. A tesztvegyület adagolása: a tesztvegyülettel és mindegyik hígítással 5—10 kísérleti állatot kezeltünk. A vizsgálandó vegyületet fiziológiás sóoldatban az 50 oldékonyság elősegítése céljából nátrium-bikarbonáttal (ekvivalens mennyiségben) homogenizáltuk és kívánt esetben az antigén-kihívás előtt 3 másodperccel 60 mikrogramm mennyiségben intraperitoneálisan adtuk, vagy az antigén-kihívás előtt 5-60 perccel per^os adtuk. 5. Antigén-kihívás és a módszer értékelése: 2 mg ovalbumin 5 ml módosított Tyrode oldatát az állatoknak intraperitoneális injekció formájában adtuk és 5 perc elteltével az állatokat felboncoltuk. A peritoneális shock folyadékot összegyűjtöttük és centrifugálással osztályoztuk. A mintákból a fehérjéket perklórsavas kicsapássnl és az azt követő centrifugálással különítettük cl. A minták hisztamln-tartalmát automatikus fluorometriás módszerrel határoztuk meg. A kezelt állatok peritoneális shock folyadékának hisztamin-szintjét a kezeletlen állatok shock folyadékával összehasonlítottuk. A gyógyászati hatékonyságot a hisztamin-felszabadulás gátlásának százalékában fejeztük ki. 1. példa 10,3 g 5-amino-tetrazol-monohidrát 300 ml tetrahidrofuránban és 15 ml vízben elkészített oldatához 9,3 g 2-nitro-bcnzoil-kloridot adunk. Az oldatot 30 percen át állni hagyjuk, majd 200 ml vízzel hígítjuk, és 72 órán keresztül hűtőszekrényben tartjuk. A képződött, szilárd anyagot szűréssel elkülönítve 2-nitro-N-(lH-tetrazol-5-il)-benzamidot kapunk. Olvadáspont: 272—273 °C (bomlik). 2. példa 19 g 2-nitro-N-(lH-tetrazol-5-il)-benzamidot 100ml vizes IN nátrium-hidroxidban és 100 ml etil-alkoholban oldunk. A rcakcióelcgyhcz ezután 0,5 g 5%-os palládium/szén-katalizátort adunk és Parr készülékben 1520 Hgmm nyomáson a hidrogénfelvétel megszűntéig hidrogénezzük. A katalizátort ezután szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet vizes 1N sósavval kezeljük. A képződött fehér szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük és szárítás után 2-amino-N-(lH-tetrazol-5- il)-benzamidot kapunk. Olvadáspont: 253—254 °C. 3. példa AJ g 2-amino-N-(lH-tetrazol-5-il)-benzamid 30 ml dimclilformamidban elkészített oldatához nitrogénatmoszférában 4,7 g frissen készített hangyasav-ecetsav-anhidridet adunk, a néhány perc alatt képződő csapadékot szűréssel elkülönítjük és éteres mosás után 2-(formil-ainino)-N-(lH-tetrazol-5-il)-benzamidot kapunk. Ez a vegyület az (1) képlettel írható le. Olvadáspont: 247-248 °C. Kitermelés: 53,6 t%. SZABADALMI IGÉNYPONT i. Eljárás 2-(formil-amino)-N-(lH-tctrazol-5-il)bcnzamld előállítására, azzal jellemezve, hogy 2-amino-N-(!H-tetrazol-5-il)-benzamidot hangyasav-ecetsavanhidriddel reagáltatunk. 60 1 rajz, képletekkel 3
