191414. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antagonista hatás vazopresszin analógok előállítására
cseppfolyós ammóniában fémnátriummal kezelünk, sómentesítés után acetonitril-víz 1 :1 térfogatarányú elegyben oldva hidrogén-peroxiddnl oxidálunk, majd az oldat bepűrlása után liofilezéssel izolált nyers termékből (1,17 0 g) 131 mg-ot 3,0 ml 20% etanolt tartalmazó 0,15 mól/l-es koncentrációjú pH 5,4-es ammóniumacetát pufferban oldunk, és 1,4X90 cm-es karboxímetilezett dextrángél (CM-Sephadex C-25, Pharmacia, Svédország) oszlopon ugyanilyen pufferoldattal 10 ml/óra sebességgel kromatografáljuk. Az eluátumot 5 ml-es frakciókban gyűjtjük, elnyelését 280 nm-en átfolyó küvettás extinkcióméterrel (Uvicord 11, LKB, Svédország) regisztráljuk. A frakciók összetételét nagynyomású kromatográfiával vizsgáljuk, a tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük. Bepárlás és liofilezés után 57,0 mg (39,2%) [t-(ß-merkapto)3,j3-dklopentametilén-propionsav), 2-0-etil-L-tirozin, 4-L-valin, 8-L- argininj-vazopresszint kapunk. Amorf anyag, Rf : 0,7, nagynyomású kromatográfiás vizsgálat szerint anyagtartalma: 87,6%, tisztasága: 91,5 %. A példában leírt módon állítjuk elő az [l-(/?-merkapto-j3 ,/3-ciklo pen tame ülén-propionsav), 2 0 etil-D-tirozin, 4-L-valin, 8-L-arginin]-vazopresszint is. Amorf anyag, Rf : 0,7; (<*],,= +103,4° (c = 0,648, 1 ni ecetsavban). Amínosav analízis: Asp 1,00, Giy 1,00, Pro 0,97, Cys 0,91, Val 1,01, Tyi + Tyr (Et) 0,99, Phe 0,98. Arg 1,01 mól/mól. Víztartalom: 3,9%; ecetsav tartalom: 14,9%. Tisztasága nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint 96,1%. 2, példa N-terc-Butüoxíkarbonil L-aszparaginil-S-benzil-ciszteinil-L-prolil-N^-tozil-L-arginil-glicinamid Mindenben az. 1. példában megadottak szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy a 2. lépésben előállított HCys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-GIy-NH2 -trifluor-acetát aciiezését a következőképpen végezzük. 1,33 mmól H-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Giy-NH2-írifluor-acetátot 6 ml dimetil-forüsamidban oldunk, és 0,186 ml (1,33 mmól) trietil-amin jelenlétében 0,470 g (1,33 mmól) Boc-Asp-ONp-rel reagáltatjuk. A reakció lezajlása után a reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, végül a kapott szilárd nyers terméket etanolból átkristályosítjuk. így 0,732 g (60,0%) Boc-Asn- Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-ot kapunk. Rj: 0,49. 3. példa N-terc-Butiloxikarbonil-L fenilalanil-L-valil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N’^-tozilL-arginilgli cinamid Mindenben az 1. példában megadottak szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy a 4. lépésben előállított H-Val- Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos) Gly-NH2-trífluor-acetát aciiezését a következőképpen végezzük. 5,48 mmól H-Val-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly- NH2-trifluor-acetátot 16,5 ml dimetil-formamidban oldunk, és 0,77 ml (5,48 mmól) trietil-ainln jelenlétében 2,85 g (6,60 mmól) Boc-Phe-OPfp-rel reagáltatjuk. A reakcióelegyet a reakció lezajlása után az 1. példában 6 megadott módon dolgozzuk fel. így 6,063 g (97,5%) Boc-Phe-Val-Asn-Cys(Bzl)Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-ot kapunk. Rf : 0,52. 4. példa N-( ß-Benzilmerkapto-ß, ß - ciklo pentametilén -propionil) - O-etii-L-titozil-L-fenilalanil-L-vülil-L-aszparaginil-S- benzil-L-ctszteinil-L-prolil-N^-tozil-L-arginil-gUcmamid Mindenbe;; az 1. példában megadottak szerint járunk el azzal az ejt éréssel, hogy a 6. lépésben előállított HTyr(Et)-Phe-V2l-Asu-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-triíluor-acctát ácsié zését a következőképpen végezzük. i ,37 g (1,00 mmól) ií-Tyr(El)-Phc-Va!-Asn-Cys(Bzl)Pro-Gly-NH2-tníii!or-aceíátoí 2,8 ml dimetü-formamidban oldunk, és 0,28 ml (2,00 mmól) trietil-amin és 0,122 g (1,00 mmól) 4-dimetil-amino-piridin jelenlétében 0,615 g (1,2 mmól) Pmp(Bzl)-OPcp-rel reagáltatunk. A reakcióelegyet másnap az 1. példában megadott módon dolgozzuk fel. Igv 1.35 g (99,0%) PmpfBzlj-TyrfEt)Plie-Val-Asn-CyiiBzll Pro-ArgjTosTGly-Nl^-ot kapunk. Olvadáspontja: 223—224 °C (bomlik). 5. példa [l-(ß-Merkapto-ß,ß-cikiopentametilen-propionsav), 2-0-etil-L-tirozin, 4-L-valin, 8-L-argimn\-vazopresszm Mindenben az 1. példában megadottak szerint jáunk el azzal az eltéréssel, hogy a 7. lépésben 1,473 g (1,00 mmól) Pmp(Bzl)-Tyr(Et)-Phe-Vaí-Asn-Cys(Bzl)Pio-Arg(Tos)-Gly NH2-ot kezelünk cseppfolyós amniőni iban fém nátriummal, majd az ammónia elápárologfatása után a kapott maradékot sómentesítjük, a sómentes peptidet 500 ml terc-butanol és 500 ml víz elegyében okijuk, és az oldat pH-ját 8,5-re állítva hidrogén-peroxiádaí oxidáljuk a példában mégadott módon. Az oxidáció lezajlása után a reakcióelegyet bepároijuk. liofiierzük A kapott cím szerinti nyers terméket az 1. példában megadott módon 1:1 arányú acetonitril-víz eiegyben oldjuk, és (Sephadex LH-20 jelű) dextrán gél oszlopon kro natografáljuk. így 55 mg cím szerinti vazopresszinanaiógot kapunk. Rf : 0,7. A kiindulási anyagként használt védett tripeptidamidot és az irodalomban még le nem írt aktívésztereket az alábbiak szerint állíthatjuk elő. A. példa Nterc-Butiloxikarbonil-L-prolil-N^-tozU-L-arginilgheinamid 20,0 g (43,2 mmól) Z-Arg(Tos)-OH-t 40 ml dimetilformamidban oldunk, 6,05 ml (43,2 mmól) trietii-amint adunk hozzá, majd -10 °C-ra hűtjük, és 5,66 ml (43,2 mmól) klórszénsav-izobutil-észtcrrcl reagáltatjuk. öt perc múlva —10 °C-on 5,43 g (43,2 mmól) H-Gly-OMe-HCl-ból, 40 ml dimctil-formamidból és 6,05 ml (43,2 mmól) trietil-aminból készített szuszpenziót adunk a reakcióelegyhez, majd 30 percig -5 és 0 °C között, I 41 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
